微生物的生理1.ppt

概念：抑制剂与酶活性中心外的必需基团结合，底物与抑制剂之间无竞争关系。 (2) 非竞争性抑制 (a a’ = 1) slope = aKm/Vmax -1/Km 1/Vmax 1.底物和抑制剂分别独立地与酶的不同部位相结合； 2.抑制剂对酶与底物的结合无影响，故底物浓度的改变对抑制程度无影响； 3.动力学参数：Km值不变，Vmax值降低。 非竞争性抑制的特点 抑制剂仅与酶和底物形成的中间产物(ES)结合，使ES的量下降。既减少从ES转化为产物的量，同时也减少从ES解离出游离酶和底物的量。 (3) 反竞争性抑制 no inhibitor 1/Vmax slope = Km/Vmax 1.抑制剂与底物可同时与酶的不同部位结合； 2.必须有底物存在，抑制剂才能对酶产生抑制作用； 3.动力学参数：Km减小，Vmax降低。 反竞争性抑制的特点 Km 酶的抑制 Competitive Non-competitive Uncompetitive 直 接 作 图 双 倒 数 作 图 Vmax Vmax Km Km’ [S], mM vo [S], mM vo I I Km [S], mM Vmax I Km’ Vmax’ Vmax’ Vmax 不变；Km 变大 Vmax 变小；Km 不变 Vmax 及 Km 均变小 I 1/[S] 1/Km 1/vo 1/Vmax I 两条平行线 I 交 于 X 轴 1/vo 1/Vmax 1/[S] 1/Km 1/[S] 1/Km 1/Vmax 1/vo 交于 Y 轴 = Km’ 七、酶活力的测定 (1) 分光光度法 (spectrophotometry) 条件：酶的底物和产物在紫外或可见光部分光吸收不同 优点： 简便、迅速、准确 一个样品可多次测定，有利于动力学研究 可检测到10-9mol/L水平的变化 (2) 荧光法 (fluorometry) 条件：酶反应的底物或产物有荧光变化 优点：灵敏度很高，可以检测10-12mol/L的样品 酶蛋白分子中的Tyr、Trp、Phe残基以及一些辅酶、辅基，如NADH、NADPH、FMN、FAD等都能发出荧光 (3) 电化学法 (electrochemical method) 条件：产物比其底物具有更大或更小的活性 优点：用铂金属构成的反应池，以及记录电压变化的微恒电流装置，能在几分钟内测定酶活力 胆碱脂酶、葡萄糖苷酶、辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、黄嘌呤氧化酶、工业用糖化酶、淀粉酶等。 有些酶反应的产物不能直接测定。需要加入另一种酶把这个产物转变为另一种容易测定的产物。 把第一种酶的反应产物作为第二种酶的反应底物。由二种酶系统在一起反应称为酶的偶联反应。这种测定方法又称为酶偶联测定法。 (4) 酶偶联分析法 (enzyme coupling assay) 酶的偶联测定 其中El是要测定的酶。E2是辅助酶。 底物 产物1 产物2 E1 E2 Enzyme 1 A B Reaction 1 Enzyme 2 C Reaction 2 Enzyme 3 D Reaction 3 Product Starting molecule 通过6-磷酸葡萄糖脱氢酶来测定己糖激酶的活性 尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸 Glucose + ATP Glucose-6-P + ADP Hexokinase 6-P-Gluconic acid NAD+ NADH G-6-P deHase 偶联反应 Dehydrogenase 所有脱氢酶都以NADH或NADPH为辅酶 240 280 360 400 320 340 NADH NAD+ 吸收光谱 NAD+ NADH 340nm 吸 光 度 波长 (nm) NAD+ / NADH+的转换可以与340nm吸光度偶联 辅酶NADH The End 0 1.酶的化学本质 蛋白质，凡使蛋白质变性的因素均能引起酶变性 2.酶的组成 酶蛋白+辅助因子=全酶 3.酶蛋白的结构 一级肽键，二级螺旋折叠 4.酶的催化特性 活细胞产生，特异性 * 尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸, 尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸, 黄素核苷酸(FMN)和黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD), 焦磷酸硫胺素 * 胞外酶是指那些在细胞内合成后穿过细胞质膜的酶.它们有些镶嵌在质膜上有些存在于周质空间有些则完全脱离其生产者扩散到环境中 胞外酶分泌机制可以用信号肽假说解释 ：编码分泌蛋白的mRNA在翻译是首先合成的是N末端带有疏水氨基酸残基的信号肽，它被内质网膜上的受体识别并与之相结合。信号肽经由膜中蛋白质形成的孔道到达内质网内腔，随机被位于腔表面的信号肽酶水解，由于它的引导，新生的多肽就能够通过内质网膜进入腔