抗虫基因载体的构建及白菜转基因研究-生物学 遗传学专业毕业论文.docxVIP

首都师范大学硕士学位论文 首都师范大学硕士学位论文 摘要 摘 要 蜘蛛杀虫蛋白(Spidcr insecticidal protein，SIP)基因可编码一种只有37个氨基 酸的小肽，该多肽能杀死多种有害昆虫。质粒pBBBast-PinII含有马铃薯蛋自酶抑 制剂基因PinII(Potato proteinase inhibitor II)，PinII基因编码的蛋白酶抑制剂具有 广谱抗虫性。实验以蜘蛛杀虫肽基因为目的基因，将其转入质粒pBBBast-PinII中， 从而构建含有PinII和SIP两个抗虫基因的双价植物表达载体——pBBB拼PinII ．SIP。同时，还将SIP基因转入pBBBast中，构建单价抗虫载体pBBBast．SIP。经 过限制性内切酶酶切以及PCR目的片段扩增证明两个载体构建正确。 通过真空渗入和花序浸渍法，将上述双抗和单抗基因分别导入白菜不结球类型 ——49菜心中，获得了7棵抗性株。通过对标记性状——除草剂抗性的活体及离体 检验(氯酚红法)、目的基因PCR扩增、PCR-Southem杂交等方法证实目的基因 已整合到小白菜基因组中。其中2棵抗性株自交后代的遗传分析表明，真空渗入法 所得的转化株为杂合体，且其分离比符合3：1的单基因分离规律。 对小白菜真空渗入转化法的转化条件进行了初步探索。结果表明植株生长阶段 和真空渗入处理时间，所用菌株类型均对转化率有影