汉防己碱的提取分离及检验.docVIP

美国得克萨斯生物医学研宄所研宄人员发现，中草药提取成分汉防己碱是埃博 拉病毒“克星”，有望在今后两到五年内用于治疗埃博拉感染疾病。 生物碱的提取分离 实验材料 汉防已粗粉 试剂、试剂盒 丙酮、乙醇、水、石油醚、乙酸乙酯、硅胶、氧化铝、碘化铋钟试剂、丙酮 仪器、耗材 圆底烧瓶、层析柱、长颈漏斗、滤纸片、气泵、 滴管、铁夹、玻璃标口塞接头、玻璃蒸发器 一、提取分离实验 X.回流提取 HOO g汉防己粗粉于1-000 w\［圆底烧瓶中，加500 95%乙醇，回流1 h，过滤, 同法提取一次，合并乙醇提取液，浓缩至干，得浸膏。 之低压柱层析 低压柱层析在低压下（^.5?3 kg/眞之，一般以3?U 采用颗粒直径介于经典柱 层析?;ZOO pm）和HPLC（?57卜似）之间的薄层层析用硅胶（或氧化铝）H或 ^56??75 pm）作为填充剂的■-?种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于 经典柱与HPLT之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层 层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操 作方便，快速的方法，适用于天然产物的常量制备性分离。 （工）装柱 减压干法装法，层析柱规格：柱长d内径工cm,共装硅胶约之5水高约之6 cm）0 （2）拌样加样 取汉防己碱约rt%kv^,加少量丙酮热溶（:刚溶为度）用滴管加到二55硅胶上，仔细拌匀， 水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击，待样品表而平整不拌 动时，上面再盖约：cm高的空白硅胶，再加盖一圆形滤纸片，压紧。 （3）洗脱 开动气泵待用。用滴管顺层析柱柱壁仔细加入少S洗脱剂（:石汕醚：乙酸乙酯3: i），当液 面达到一定高度时，再一次加入其余洗脱剂（:共约mO,迅速在柱顶上装上玻璃标口塞 接头，用铁夹压紧（:防加压时接头冲开），连接气泵接头，控制流速：twf/M一，每rto分钟 左右一管，收1之?工5?份，洗脱全过程约2小时。 （4）检查 各流份分別移入小玻璃蒸发器屮，于水浴上浓缩，分別通过TLC检查，吸附剂：硅胶6?， 展开剂：石汕醚：乙酸乙酯3: !?，改良碘化铋钾试剂喷雾显色，以汉防已甲素、乙素为标 准品对照，合并相同组分，分别获得甲、乙素粗品，用丙酮重结晶，测定wp。 二、鉴定方法 工.有机胺碱的T1X 吸附剂：薄层层析硅胶6；,用水液制板，rtrto °C活化1小时。 样品：分出的汉防已甲素①、乙素②、 展开剂：石油醚-（6:之：工） 显色剂：改良碘化铋钾试剂（:展开后用电吹风吹干再喷显色剂，以免二乙胺干扰） 现象：甲素显色后呈淡棕色，2小时左右就褪色，而乙素呈棕色，久置不褪色，可帮助其辨 认。 总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离 汉防己药材粗粉100g 0.5%H2SO4液渗漉（注一） 酸水渗漉液（为原料的3?10倍量V/V） 加新鲜石灰乳调pH9?10,静置，抽滤 泥黄色沉淀碱水液 泥黄色沉淀 碱水液 （水溶性季铵碱及水溶性杂质） 将沉淀与静砂拌勻（注二） 80°C烘干.置索氏提取器中用乙醚（约180ml）提取至 提尽生物碱（注三） 收乙醚（注四） 乙醚提取物 用95%乙醇40?60ml回流热溶后 倾入500ml水中，力口30gNaCI盐析 水溶上加热至凝结，静置 抽滤 白色沉淀（亲脂性叔铵总碱，以汉防己甲素、乙素为主） 注工：将汉防已祖粉加适S酸水液，以能将生药粉末润湿为度（:约iso M/），充分拌匀，放 置半小时，均匀而致密地装入渗筒内，用锥形瓶底部或其它平底工具压紧，供渗漉用，流速 约工.S mf/分。 注之：净砂必须事前洗净烘干，拌和y:最好不要超过126? +以免索氐提取器一次装不下 或装得过多。提不尽生物碱。 注3:检查生物碱是否提尽的方法，是取最后一次乙醚提取液约数滴，挥去乙醚，残渣加 容解后，加改良碘化铋钾试剂一滴，无沉淀折出或明显浑浊时，表明生物 碱己提尽，或基本提尽。反之，应继续提取。 注4:先将提取器内滤纸筒取岀。然后将提取玻筒内最后一次乙醚提取液倾fli（另器贮存：）， 再将提収玻筒安装好，继续加热，回收烧瓶屮乙醚于玻筒屮，至烧瓶lAl的乙醚提収液体积较 小时，停止回收，将烧瓶中乙醚提取液倾出。 二、鉴定方法 X.有机胺碱的TLC 吸附剂：薄层层析硅胶6；，用水液制板，活化1小时。 样品：分出的汉防已甲素①、乙素②、总碱③ 展开剂：石油醚-（6:之：工） 显色剂：改良碘化铋钾试剂（展幵后用电吹风吹干再喷显色剂，以免二乙胺干扰） 现象：甲素显色后呈淡棕色，2小时左右就褪色，而乙素呈棕色，久置不褪色，可帮助其辨 以下实验可在课后选做 2-衍生物制备 取汉防已甲素+溶于2 丙酮中，滴加苦味酸饱和水溶液至不再折出黄色沉淀为止， 抽滤收集沉淀，顺次以少量水乙醚