枯草和纳豆芽孢杆菌抗菌物质性质及益生菌剂应用的研究-微生物专业毕业论文.docxVIP

摘要近年来，由于抗生素在农业生产和医疗领域的大量应用，导致耐药、抗药的病原 摘要 近年来，由于抗生素在农业生产和医疗领域的大量应用，导致耐药、抗药的病原 菌株El益增加，为控制动植物和人类病原菌带来的巨大的困难。因此研究开发广谱、 高效、具有新作用机制的新型抗生素已成为当前一项十分迫切的任务。同时，抗生 素在养殖业中长期和过量使用，不但引起了诸如养殖环境生态失衡等问题，而且导 致农产品的抗生素残留，危害消费者的健康。以益生菌为主的微生态制剂的应用， 逐渐成为替代抗生素，控制病原菌，改善水质的重要途径。芽孢杆菌类细菌是微生 念试剂的理想益生菌。 本论文对产生抑制溶藻弧菌和自假丝酵母抗菌物质的枯草芽孢杆菌Bs-l和纳豆 芽孢杆菌Bn-1进行了研究。 对两株芽孢杆菌的发酵培养基条件进行的研究，表明PDB培养基为两株芽孢杆菌 产生抗菌物质的较理想培养基。 测试两株芽孢杆菌的抗菌物质对不同因予的稳定性。结果表明枯草芽孢杆菌 Bs-1抗菌物质对热(100℃)和蛋白酶较稳定，而纳豆芽孢杆菌Bn-i抗菌物质的 稳定性稍逊于Bs一1的；两株芽孢杆菌的抗菌物质对SDS和尿素都表现出一定韵敏感 性；在室温下，两株芽孢杆菌的抗菌物质对强酸强碱较稳定，沸水加热30min后活 性都有一定下降。 研究溶藻弧菌在不同的平板培养条件下，对两株芽孢杆菌抗菌物质敏感性的差异， 表明平板pH在约5．0～6．5时，镕藻弧菌对抗菌物质比较敏感；而琼脂培养基的盐度越 低、厚度越小，对溶藻弧菌对抗菌物质就越敏感。 利用活性炭吸附、DEAE—Sepharose FF离子交换层析和HPLC对Bs一1发酵液的 抗真菌代谢产物进行纯化，获得至少含有两类抗菌物质的提取物。 初步尝试将两株芽孢杆菌的PDB培养液作为益生菌，应用于营养化海水中弧菌的 控制，测试加入不同体积发酵液的抗弧菌效果，及在不同盐度和pH条件下的抗菌效 果。结果表明，Bn．1发酵液的抗菌效果较差，部分样品加入Bn．1培养液之后，弧菌 浓度反而比负对照更高；Bs-1发酵液则取得比较稳定且理想的效果，基本可降低弧菌 浓度达55％或以上(与负对照相比)，有望成为应用于海水养殖的微生态制剂。 浓度达55％或以上(与负对照相比)，有望成为应用于海水养殖的微生态制剂。 关键词：枯草芽孢杆菌，纳豆芽孢杆菌，抗菌物质，分离纯化，益生菌 ABSTRACTBecause ABSTRACT Because of the improper and long-term antibiotics treatment in agriculture as well in human disease，the antibiotics—resistance microbes increase dramaticaUy．It causes great difficulty in controlling the pathogen of crops，animals and human．So it becomes very urgent to exploit new antibiotics with broad-spectrum，high efficiency and new biocontrol mechanisms．Meanwhile，the antibiotics treatment in aquaculture would not only affect the ecological balance of the breeding environment，but also produce antibiotics-contain food that causes potential health problems of its consumer．Employing the probiofics(beneficial bacteria)agent is an effective substitute for controlling the pathogens and improving health of the animals． In this thesis，we studied two strains ofBacillus(Bacillus subtilis：Bs．1 and Bacillus natto：Bn-1)with potential of producing antimicrobial compounds that inhibit Hbrio alginolyticus and Candida albicans． The study of media for producing antibiotics showed that PDB is