马血中SOD和凝血酶的提取及膜浓缩工艺研究-食品科学专业毕业论文.docxVIP

本文是国家自然科学基金项目“动物血液中 SOD、凝血酶 提取及浓缩关键技术研究”资助的部分研究成果 项目编号： 课题合作人：热合满·艾拉 副教授 （新疆农业大学食品科学与药学学院） I I 马血中 SOD 和凝血酶的提取及膜浓缩工艺研究 摘 要 本文以马血为原料，在单因素实验的基础上，通过响应面法和正交分析法分别优化马血中 SOD 超声波提取及热变性纯化条件；主要研究不同截留分子量的 RC 超滤膜通量和膜浓缩的 SOD 和凝血 酶比活力之间的关系，从而选出合适的膜，在此基础上，进一步考察马血 SOD、凝血酶原和凝血酶 浓缩过程中料液温度、操作压力、进料流速及浓缩倍数对膜通量的影响，并确定最佳膜浓缩工艺参 数。此外，在单因素实验的基础上，通过正交分析法优化超滤膜清洗条件，从而确定最优膜清洗工 艺参数。最后再用单因素实验和响应面法优化马血凝血酶原激活条件，进而确定最优激活条件。 在单因素实验的基础上，采用响应面法优化马血 SOD 超声波提取工艺条件并采用正交分析方法 得到最佳热变性纯化工艺参数。确定马血中 SOD 的最优提取工艺条件为：超声时间 15min、超声功 率 220W、超声温度 31℃，在此条件下 SOD 比活力可达 77.5U/mg；最佳热变性纯化工艺条件为： 热变时间为 20min、热变温度为 50℃、Cu2+添加量为 2.5%，该条件下 SOD 比活力为 668.5U/mg。 通过使用三种不同截留分子量的 RC 超滤膜对马血 SOD 的膜通量及比活力进行对比实验，得到： 截留分子量为 10kDa 的 RC 超滤膜是浓缩 SOD 较理想的膜。 通过考察几种浓缩工艺参数对马血 SOD 膜浓缩的影响，确定最佳浓缩条件：料液温度为 20℃、 操作压力为 0.20MPa、进料流速为 53.50m/s、浓缩倍数为 2 倍。单因素和正交试验结果表明，在膜 浓缩过程中，污染物为 SOD 粗酶液时，其最优清洗条件为：清洗剂为 2%柠檬酸和 0.3%NaOH、清 洗时间为 40min、清洗温度为 35℃，在此条件下膜通量恢复率达到 94.12%。 通过膜通量和凝血酶比活力对比实验，确定适用于凝血酶原和凝血酶液浓缩的膜分别为截留分 子量为 50kDa 和截留分子量为 30kDa 的 RC 超滤膜。 通过研究几种浓缩工艺参数对膜浓缩的影响，确定马血凝血酶原提取液的最佳膜浓缩条件：料 液温度为 5℃、操作压力为 0.15MPa、进料流速为 35.67m/s、浓缩倍数为 3 倍；凝血酶的最佳膜浓缩 条件：料液温度为 6℃、操作压力为 0.20MPa、进料流速为 71.34m/s、浓缩倍数为 2 倍。超滤膜清洗 条件：首先使用蒸馏水在 55℃条件下清洗 50min，其次再用 2%柠檬酸和 0.3%NaOH 为清洗剂，温 度在 35℃条件下清洗 40min。然后用 2%HCl，30℃条件下清洗 25min，最后用蒸馏水循环冲洗膜浓 缩设备 30min。 在单因素试验的基础上，采用响应面法优化凝血酶原的激活条件，确定最优激活条件：激活时 间为 2.8h、激活温度为 32℃、Ca2+浓度为 0.11mol/L，在此条件下凝血酶比活力达到 51.16U/mg。 关键词:马血；SOD；提取；纯化；凝血酶；膜浓缩；激活 II II Study on the Extraction and Membrane Concentration Technology of Horse Blood SOD and Thrombin Abstract This paper using horse blood as raw material, based on the single factor experiment, by response surface method and orthogonal analysis method to optimize the horse blood SOD ultrasonic extraction and purification conditions of heating denaturation. By using RS ultrafiltration membranes with different molecular weight cut off maked comparative experiments on membrane flux, specific activity of SOD and thrombin after concentrate, the best membrane molecular weight cut off was chosen. On the basis of this,