黄芩提取物对内质网应激参与的小鼠酒精性肝损伤的保护作用-药理学专业毕业论文.docxVIP

1 1 黄芩提取物对内质网应激参与的小鼠酒精性肝损伤 的保护作用 研究生：董清清 指导老师：刘浩 中文摘要 目的： 探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)是否参与酒精性肝病的 病理生理过程。通过测定黄芩提取物（Scutellaria radix extract, SRE）对急性酒精 性肝损伤小鼠作用的有关因子，初步探讨该提取物的护肝作用及内质网应激参与 机制，为临床寻找理想的保肝药物提供实验和理论依据。 方法： 高效液相法 鉴定黄芩提取物中有效成分黄芩苷的含量 酒精诱导肝损伤动物模型的建立及药物干预 雄昆明小鼠 60 只，分为 6 组：正常 组、模型组、硫普罗宁阳性对照组(30mg/kg)、SRE 干预组（40、80 及 160mg/kg)， 10 只 一组 。 硫 普 罗 宁 和 SRE 均 混 悬 于 0.5% 的 羧 甲 基 纤 维 素 钠 (Sodium carboxymethyl cellulose, CMC-Na)溶剂，以每天灌胃的方式给药。上午 9 时，药 物干预组小鼠分别以 30mg/kg 的硫普罗宁以及 40mg/kg、80mg/kg、160mg/kg 的 SRE 灌胃，其它组给予 0.5%CMC-Na 灌胃，均每天 1 次。除正常小鼠予蒸馏水， 剩余小鼠均在每日下午 3 点用 50%的酒精 10ml/kg 灌胃 1 次，连续 14 d。 衣霉素诱导内质网应激动物模型的建立及药物干预 雄昆明小鼠 70 只，分为 7 组：正常组，二甲基亚砜（Dimethyl sulfoxide, DMSO）对照组，模型组，硫普 罗宁阳性药组(30mg/kg)，SRE 干预组（40、80 及 160mg/kg)，一组 10 只。衣霉 素溶于 DMSO,其它药物均混悬于 0.5%CMC-Na，以每天灌胃的方式给药。上午 9 时，药物干预组小鼠分别以 40mg/kg、80mg/kg、160mg/kg 的 SRE 以及 30mg/kg 的硫普罗宁灌胃，其它组给予 0.5%CMC-Na 灌胃，每天 1 次，连续 14 d。在第 14 天下午 3 点，除正常组蒸馏水灌胃，溶媒对照组予相应体积 0.5%DMSO 灌胃 外，其余各组均用 1 mg/kg 衣霉素灌胃。 末次灌胃 16h（禁食非限制饮水）后，摘眼球法取血，检测血清丙氨酸氨基 转移酶 (alanine aminotransferase, ALT ）、 天 冬 氨 酸 氨 基 转 移 酶 （ aspartate 2 2 aminotransferase, AST）及甘油三酯（triglyceride, TG）的含量；采用酶联接免疫 吸附剂测定法(enzyme-linked immunosorbent assay, Elisa)检测血清中葡萄糖调节 蛋白 78(glucose-regulated protein78, GRP78)的含量。剖取小鼠肝脏，计算肝脏指 数；取肝左叶，制备 10%肝匀浆，测定肝组织中丙二醛(Malondialdehyde, MDA)、 还原型谷胱甘肽(Glutathione, GSH)的含量。选取肝右叶，制备切片（5μm 厚）， 采用苏木素-伊红(Hematoxylin and eosin, HE)染色，探察肝脏病理损伤。免疫组 化法查看肝脏组织内 GRP78 的分布情况。末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸 脱氧尿甘缺口标记法(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling, TUNEL)观察 小鼠凋亡肝细胞数。 结果： 1. 高效液相法鉴定得出黄芩提取取物中有效成分黄芩苷的含量是 31.2%。 2. 相对正常鼠，酒精模型小鼠除肝内 GSH 活性降低外，肝指数、血清 ALT、 AST 及 TG，肝组织 MDA 数值均增大显著(P0.01)。 3. 与正常组比较，酒精模型组小鼠肝细胞脂肪空泡，将细胞核挤压至一边， 伴有不同程度地中性粒细胞浸润，并可见点、碎片状坏死。 4. 通过 Elisa 法和免疫组化技术测定 GRP78 在小鼠血清和肝脏中的浓度和 分布：相对正常对照组，酒精模型组小鼠血清中的 GRP78 的含量明显升高 （P0.01），肝组织内出现明显的 GRP78 黄棕色特染。 5. 采用 TUNEL 技术观察小鼠肝细胞凋亡：与正常组相比，酒精模型组小 鼠肝细胞凋亡数目明显增多。 6. 在酒精诱导的急性肝损伤小鼠和衣霉素诱导的内质网应激小鼠中均可发 现黄芩提取物能显著减低两个模型组中肝功能和血脂水平，修复病理损伤，降低 血清和肝脏 GRP78 水平。抑制肝 MDA 浓度增加和 GSH 活性降低，减少凋亡肝 细胞数目。 结论： 1. ERS 参与小鼠急