黄芪注射液对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护作用及机理分析-中医骨伤学专业毕业论文.docxVIP

黄芪注射液对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护作用及机理研究 黄芪注射液对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护作用及机理研究 湖北中医药大学 湖北中医药大学 2015 届博士学位论文 PAGE PAGE VII PAGE PAGE VI 中文摘要 目 的：通过动物实验研究黄芪注射液对大鼠脊髓缺血再灌注模型是否具 有保护作用以及保护作用的机理。 方 法：采用 Zivin 法，建立大鼠脊髓缺血再灌注模型。33 只 SD 大鼠随 机分为假手术组(A 组，n=3)、缺血再灌注组(B 组，n=15)、黄芪组（C 组， n=15 )。A 组只进行麻醉和开腹手术操作，不阻断腹主动脉，麻醉前腹腔 给予 0.9%氯化钠注射液；B 组麻醉前腹腔给予 0.9%氯化钠注射液，麻醉 后阻断腹主动脉 32 分钟后再灌注；C 组麻醉前 30 分钟腹腔注射黄芪注射 液，麻醉后阻断腹主动脉 32 分钟后再灌注。再灌注 2h、8h、12h、24h、 48h 后分别对三组动物进行后肢运动功能评分（BBB 法）。并于各个时间点 分别将三组动物麻醉后，下腔静脉取血 4mL 并切取 L2-4 脊髓组织进行血 清 NSE、脊髓组织 HE 染色、测定脊髓组织中 Ca2+浓度、AQP4 表达及凋亡 指数。 结 果：1、大鼠后肢神经功能 BBB 评分结果：模型组和黄芪组动物清醒 后均出现不同程度后肢运动障碍，模型组和黄芪组实验动物后肢神经功能 评分显著低于空白组(P0.05)。随着缺血后再灌注时间延长，两组动物后 肢运动功能均出现恢复，其中黄芪组动物后肢运动功能恢复速度较快，而 模型组动物后肢运动功能恢复较慢，而且在 48 小时后实验动物尾部功能 仍不能恢复，处于垂尾状态，在各时间点黄芪组后肢神经功能 BBB 评分 显著高于模型组(P0.05)。 2、脊髓组织 HE 染色结果：假手术组：400 倍光镜视野中脊髓组织 结构清晰，未见白细胞浸润、水肿等。神经元细胞轮廓清晰，胞核、尼氏 体正常。模型组：脊髓组织水肿，结构不清晰，有大量白细胞浸润，有少 量红细胞渗出，同时可见胶质细胞增生；大量神经元细胞退变、坏死，组 织内可见空泡形成；神经元细胞核固缩，尼氏体消失。黄芪组：病理变化 在相应时间点明显好于模型组，但也仍可见组织水肿，少量白细胞浸润， 未见红细胞渗出，胶质细胞轻度增生；组织内有空泡形成，但仍可见较多 正常神经元残存；神经元细胞同样存在核固缩，尼氏体消失等变化。 3、大鼠血清 NSE 浓度检测结果：模型组和黄芪组两组大鼠脊髓缺血 再灌注后血清 NSE 浓度明显高于空白组(P0.01)；黄芪组在缺血再灌注后 2h、8h、12h、24h 四个时间点血清 NSE 浓度明显低于模型组(P0.01)， 而黄芪组在缺血再灌注后 48h 血清 NSE 浓度高于模型组(P0.01)。模型组 在缺血再灌注后 12h 可见血清 NSE 浓度达高峰，而后逐渐回落；黄芪组 在缺血再灌注后 24h 可见血清 NSE 浓度达高峰，而后逐渐回落，但回落 趋势慢于模型组，并于缺血再灌注 48 小时血清 NSE 含量高于模型组。与 模型组相比，黄芪组缺血再灌注后血清 NSE 含量峰值低于模型组，波动 幅度小于模型组。 4、大鼠脊髓组织 Ca2+浓度检测结果：B、C 两组脊髓组织中 Ca2+浓度 在各个时间点均高于 A 组（P0.01），在缺血再灌注后 2h、8h、12h、24h 四个时间点，C 组（黄芪组）脊髓组织中 Ca2+浓度低于 B 组（模型组），但 在缺血再灌注后 48h，C 组（黄芪组）脊髓组织中 Ca2+浓度高于 B 组（模 型组）；其中 B 组在再灌注 12h 后达到峰值，其后逐渐回落，而 C 组在再 灌注 2h 逐渐上升，在再灌注后 48h 达到峰值，但 C 组峰值低于 B 组峰值。 5、蛋白免疫印迹法检测大鼠脊髓组织 AQP4 表达：模型组大鼠脊髓 组织中 AQP4 在缺血再灌注后 2-48 小时 5 个时间点表达呈上升趋势，在 48h 点达到最高峰；黄芪组大鼠脊髓组织中 AQP4 在缺血再灌注后 8 小时 达到高峰，随后逐渐降低；但模型组、黄芪组两组脊髓组织中 AQP4 表达 均高于空白组（P0.01），其中黄芪组在各个时间点 AQP4 表达均低于模 型组（P0.01）。假手术组大鼠脊髓组织中 AQP4 表达在术后呈下降趋势， 并于术后 12h 后基本保持稳定。 6、原位末端标记法检测大鼠脊髓中凋亡细胞结果：空白组切片显示 400 倍视野内可见神经元细胞蓝染，细胞形态正常，细胞核结构清晰，胞 质中尼氏体存在，少量细胞核为棕黄色凋亡细胞；模型组切片 400 倍视野 可见部分神经元细胞形态尚存，但细胞核明显染为棕黄色(凋亡早期)，细 胞质内尼氏体消失，视野中也可见到明显为棕黄色的凋亡小体(凋