霉茶提取物对大鼠血管功能影响及机制研究-中药学专业毕业论文.docxVIP

目 录 摘 要 I Abstract III 英文缩略词 VI 前 言 1 1 研究目的及意义 1 一、霉茶提取物对离体血管环活性部位筛选 3 1 霉茶有效成分的提取 3 2 霉茶不同提取部位对 NA 缩血管反应的影响 4 3 讨论 7 4 小结 8 二 霉茶黄酮类成分对离体血管环的作用 9 1 仪器与材料 9 2 实验方法 10 3 实验结果 11 4 讨论 14 5 小结 16 三 霉茶总黄酮对 SHR 大鼠血管舒张功能及重塑的影响 17 1 仪器与材料 17 2 实验方法 18 3 实验结果 25 4 讨论 38 5 小结 42 结 语 43 参考文献： 44 文献综述： 51 攻读硕士期间发表论文情况： 62 致 谢 63 I I PAGE PAGE VI 摘 要 目的 对霉茶乙醇提取物不同极性洗脱部位进行离体血管实验研究得到霉 茶血管药效活性部位。利用正常大鼠离体胸主动脉环和原发性高血压 （SHR）大鼠作研究材料，借助分子生物学实验技术研究霉茶提取物对血 管结构和功能的影响，并探索其作用机制。以期为霉茶资源的合理开发利 用提供理论和实验依据。 方法 1. 霉茶提取物对离体血管环活性部位筛选 首次对霉茶乙醇提取物不同极性提取部位进行离体血管环实验研，观 察霉茶乙醇提取物甲醇部位、乙酸乙酯部位、丙酮部位、石油醚部位及氯 仿部位对去甲肾上腺素（NA）所致的缩血管反应的影响。 2. 霉茶黄酮类成分对离体血管环的作用 对霉茶乙酸乙酯部位离体血管环作用活性追踪,以离体大鼠胸主动脉 血管环为研究对象，经生物信号采集系统记录血管环张力变化，观察霉茶 总黄酮、二氢杨梅素、杨梅素对血管基础张力的影响以及对 NA 所致的缩 血管反应的影响，并观察二氢杨梅素与杨梅素不同浓度合用的协同作用。 3. 霉茶总黄酮对原发性高血压大鼠（SHR）血管舒张功能及重塑的影响 将 50 只 SHR 大鼠随机分为模型组、总黄酮低剂量组（90 mg·kg-1）、 总黄酮中剂量组（180 mg·kg-1）、总黄酮高剂量组（360 mg·kg-1）和复 方罗布麻片组（50 mg·kg-1），每天灌胃给药 2 次，连续灌胃 7 周。尾动 脉无创测压法观察大鼠血压变化，HE 染色测定胸主动脉形态学指标，离 体血管张力测定法检测胸主动脉舒张功能反应性，硝酸还原法检测血清 NO 含量，Real-Time PCR 测定胸主动脉组织 eNOS 、ACE、Ang Ⅱ、C-myc、 Bcl-2、P27 基因的表达。 结果 1. 霉茶提取物乙酸乙酯部位能使 NA 缩血管的量-效曲线非平行右移并使 NA 缩血管效能（Emax）降低，而其它霉茶提取部位无显著拮抗 NA 收缩效应。 2.乙酸乙酯部位的主要化学成分霉茶总黄酮、二氢杨梅素、杨梅素均可浓 度依赖性增加血管环静息张力；霉茶总黄酮能使 NA 缩血管的量-效曲线非 平行右移并降低其 Emax；二氢杨梅素、二氢杨梅素与杨梅素的混合物有与 霉茶总黄酮相似的效应且霉茶总黄酮作用强于二氢杨梅素、二氢杨梅素与 杨梅素的混合物；二氢杨梅素与杨梅素合用使 NA 收缩血管的 Emax 降低， 明显强于二者单独使用；当二氢杨梅素与杨梅素浓度比为 10:1 时，拮抗 NA 缩血管的效应最佳。 3. 霉茶总黄酮可以抑制 SHR 大鼠血压随自然病程的上涨，中、高剂量总 黄酮能明显降低血管中膜厚度，且高剂量总黄酮能明显降低血管中厚度与 管腔直径比；可以剂量依赖性的改善离体 SHR 大鼠胸主动脉环对 Ach 诱 导的血管舒张反应，对 SNP 诱导的血管舒张反应作用无显著差异；中、高 剂量总黄酮能明显能上调血管组织中 eNOS 基因，升高血清中 NO 含量；霉 茶总黄酮各剂量均能下调血管组织中 ACE、Ang Ⅱ、C-myc、Bcl-2 基因同 时上调 P27 基因表达。 结论 1. 霉茶乙醇总提取物的乙酸乙酯洗脱部位有较强的血管调节作用，能抑 制 NA 收缩血管反应，为离体血管环有效活性部位。 2. 霉茶乙醇总提取物的乙酸乙酯部位主要成分总黄酮对血管基础张力有 剂量依赖性收缩作用但能明显拮抗NA缩血管效应且作用强于二氢杨梅素、 二氢杨梅素与杨梅素的混合物；二氢杨梅素与杨梅素对抑制NA诱导血管收 缩反应有协同增效作用且最佳协同比例为霉茶总黄酮中原始比例（即 10:1）。 3.霉茶总黄酮能缓解高血压症状，改善高血压引起的血管舒张功能失调和 血管重塑。上调胸主动脉 eNOS 基因表达水平，增加 NO 的合成有关。其抑 制高血压引起的血管重塑作用可能与调节 RAS 系统相关基因及 VSMC 增殖 相关基因有