空心莲子草组织培养及干旱和盐诱导基因表达载体构建研究-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

华 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 I I 摘 要 干旱是作物最普遍面临的逆境，盐渍对植物的危害包括离子毒害和类似干旱的 渗透胁迫作用。干旱和盐渍对植物生长和农作物产量的危害超过其它自然灾害之和。 分离和筛选抗旱抗盐相关基因，用于作物基因改良是传统方法之外增强作物逆境适 应性的有效手段。空心莲子草(Alternanthera philoxeroides (Mart.) Griseb.)作为两栖植 物和盐生植物，抗旱抗盐能力强，是研究植物抗逆机理的优良材料，也将是耐盐耐 旱等基因的重要来源。此外，空心莲子草的环境净化和药用价值也吸引了人们越来 越多的关注。 本文对空心莲子草的研究从两个方面展开：一方面，建立了空心莲子草离体再 生体系，并通过正交设计试验探讨了组织培养的影响条件。结果显示：空心莲子草 愈伤组织诱导率受外植体类型、初始暗培养时间和生长素 2,4-D 显著影响，且影响力 依次升高。最佳愈伤组织诱导条件为：以幼茎段为外植体，在半固体 MS 培养基上 添加浓度为 0.5 mg l-1 6-BA, 1.0 mg l-1 2,4-D 和 30 g l-1 蔗糖, 温度控制在 25 ± 2?C, 初始暗培养 20 天后，14 h/10 h 光周期 1500 勒克斯光强下见光培养。最佳条件下， 愈伤组织诱导率达 90％以上。愈伤组织芽分化是空心莲子草组培的限制步骤，芽分 化率受细胞分裂素 6-BA 和初始光照培养时间的显著影响。芽分化最佳条件是：在半 固体 MS 培养基上添加浓度为 2.0 mg l-1 6-BA, 0.5mg l-1NAA 和 30 g l-1 蔗糖, 温度 控制在 25 ± 2?C, 14 h/10 h 光周期见光培养。再生茎芽生根显得容易，6-BA(≤2.0 mg l-1) 与 NAA(0.01～0.5 mg l-1)搭配，在半固体 MS 培养基见光培养可以获得 97％的生根 率。在以上条件下，空心莲子草三个月左右可以实现离体再生。空心莲子草组织培 养是研究其抗盐抗旱分子机理的基础，同时也是为增强该材料环境净化、药用价值 等优良性状进行转基因研究的前提。 另一方面，构建干旱和盐胁迫相关基因序列的表达载体。包括构建 EST 序列 S2910(Genebank 序列号：DQ492290.1)植物反义表达载体：pBI121-S2910，和基因序 列 D2714(Genebank 序列号： DQ985704.1)毕赤酵母表达载体: pGAPZα-D2714。这些 II II 序列由课题小组高建明博士通过 DDRT-PCR 技术从干旱和盐胁迫的空心莲子草中分 离得到。表达载体构建旨在下一步鉴定这些基因序列的功能，筛选有价值的抗旱抗 盐基因。 关键词：空心莲子草; 干旱胁迫; 盐胁迫; 组织培养; 表达载体构建 PAGE PAGE IV Abstract Drought is the most severe abiotic stress to crops, and so is it with salinity stress which causes damages to plants by ion toxicity and drought similar osmotic stress. Damages of drought and salinity to plant growth and crop productivity exceed the sum of the other natural disasters. Compared with traditional methods, identification and genetic manipulation of drought and salinity related genes to crops are efficient ways to stress resistance. Alternanthera philoxeroides (Mart.) Griseb. is a kind of plant with strong drought and salinity adaptation, thus it would be a good material for researching the mechanism of plant stress tolerance, as well as a resource for those stress resistance related genes. Besides, its environmental decontamination ability and medicinal value