抗粗缩病RNA干扰表达载体的构建和玉米茎尖生长点原位转化-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

论文独创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取 得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包 含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学 或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所 做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研先生 t: 易协牙 1-0 10 年 6 月协扭 关于论文使用授权的声明 本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即:学校有权保留井向国家布 关部门戒机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描 等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学 位论文的全部或部分内容。 川州州 ，，州川川 川州州 ，， 州川川oo mm川唰41· m唰唰咄咄41 . 唰唰唰nυ 州川川00 41· 恻 州州Y 师签名:多问  如{o 年 6 月份日 ìtb 年{月J日 目录 中文摘要……… Abstract..川川…川..川...川…川..川…川..……川...川..川..川..川...川……...川川川川..川…川 11 l 文献综述...川川.川川川...川川川…..川川川…川.…..…...川….川..…..叫..川..川…..川…………………..川…...……………川...川. 1.川.1玉米粗缩病的概况…….……...………..…………川……… 1 1.1.1 玉米粗缩病的危害…………………………………………………………川 1 1.1.2 玉米粗缩病的病原及症状………………… 1 1.1.3玉米粗缩病的发病规律……………………………… ...3 1.1.4 玉米粗缩病的发生及防治…… 3 1.1.5 玉米粗缩病抗病遗传研究…………………………… 5 1.2RNA 干扰及其在植物研究中的应用……………… 6 1.2.1 RNAi的发现……………………………………………………… 6 1.2.2 RNAi的分子机制…………………………………… 7 1.2.3 RNAi 的特点………………………………… ..8 1.2.4 RNAi技术在植物上的应用…………………………………………………… 8 1.3 玉米遗传转化的研究进展……………………………………………… .11 1.3.1玉米转化受体系统的研究…………………… 11 1.3.2 玉米转化方法的研究进展……川…………………… 13 1.4本研究的目的和意义……………………川… 17 2. 材料和方法…...……...….………..…...…...……..川……..川…...…………..……...…..………. 2.1实验材料…………..………..…...叫…川…………..川...…………………………..…………………… 18 2.1.1 植物材料…………………………………………………………川 18 2.1.2 菌株、质粒和引物……………………………… 18 2.1.3酶和试剂…………………………………… 18 2.1.4 培养基和抗生素……………………………………… ..19 2.2 载体的构建………………………………………川 ..20 2.2.1 目的片段的获得…………………………………………… .20 2工2 中间载体的构建…………… 23 2.2.3 RNAi表达载体的构建………………………… 25 2.3表达载体转化农杆菌……..……………………… ...27 2.3.1农杆菌感受态细胞的制备…………………………………………… 27 2.3.2 冻融法转化农杆菌 C58 川………………… 27 2.4玉米茎尖生长点的原位转化 ι…………川 28 2.4.1 侵染液的制备…………………………………… 28 2.4.2 受体材料的准备……………………………川… ...28 2凡3 侵染及培养…………………………..………………… 28 2.4.4除草剂临界浓度筛选………………川…… 28 2.4.5 抗性植株筛选与移栽……………………………………川……川.…川.29 2.5 转基因植株的检测…..川…...…..……..… 2.5.1玉米慕因组 DNA 提取 …..…….…….………..………………………………...…...…川