罗非鱼血液中超氧化物歧化酶和血红素的分离纯化及其特性分析-食品科学与工程专业毕业论文.docxVIP

上海海 上海海洋大学硕士学位论文 II II 力学模型分析，对 SOD 酶学性质进行研究，结果表明：罗非鱼血 SOD 对 KCN 和 H2O2 敏感，紫外特征吸收波长为 260nm，荧光光谱扫描的最大激发波长 λex 为 289nm， 最大发射波长 λem 为 327nm，SDS测得其亚基分子量约为 16KDa，它在 pH 5-9、 70℃以下稳定，在邻苯三酚氧化体系中的米氏常数 Km 为 0.4mmol/L，最大反应速 率 Vmax 为 400μmol/min。 （3）血红素的酶解法提纯工艺研究 采用酶解法制备血红素粗产物，再通过热处理、酸沉淀、离心和真空冷冻干 燥等方法得血红素终产品。通过对酶解等工艺条件进行优化研究，得到血红素提 纯最优条件：①酶种类的选择：经复合酶水解的血红素浓度最高，为 65.9 mg/100mL， 水解效果最佳，最适反应温度为 40℃，最适 pH 为 7.0。②单因素试验和正交实验 确定的最佳酶解条件：底物浓度 6%、酶添加量 8000U/g、酶解时间 2h。③热处理： 将酶解液进行沸水浴处理 15min，然后冷却至室温，用 2M 氢氧化钠溶液将酶解液 调成 pH 9-10 的弱碱环境，充分搅拌后静置 20min，离心(3000×g，10min)，去除沉 淀。④酸沉淀：用冰醋酸调节酶解液 pH 5-6，充分搅拌后静置 20min，离心(3000×g， 10min)，收集沉淀。 血红素产品的提纯结果：回收率为 80.9%，纯度为 28.2%。 （4）血红素相关性质研究 通过超滤技术定性分析、紫外-可见光谱扫描图谱分析、高效液相色谱定性分 析、Fe2+/Fe3+组成分析以及外观分析等，对血红素产品相关性质进行研究：①超滤 定性分析发现，所得产品中约25%的血红素以与多肽结合的形式存在，相对分子量 在5-10KDa范围内，而75%的血红素则可能以单体的形式存在。②样品与血红素标 准品进行紫外-可见光谱扫描和HPLC定性分析发现，样品特征波长为385nm，样品 中的特征成分为血红素，且含量与28.2%一致。③Fe2+和Fe3+含量分析可知，样品 中二价铁残留率为37%，因此，在样品制备过程中应该加强二价铁的保护。④样品 外观性状研究发现，血红素标准品在显微镜下观察为紫色针状晶体，样品呈紫色 针状晶体或蓝紫色粉末状。 关键词：罗非鱼血，超氧化物歧化酶(SOD)，血红素，离子交换(IEX)，酶解， 性质研究 III III Research on Purification and Characterization of Superoxide Dismutase and Heme from Tilapias Blood ABSTRACT The abundance of Tilapias resources in China constantly promotes the industrialization of Tilapias product. Blood is a major by-product of Tilapias processing, which has a plenty of bioactive substances, but it always be discharged uselessly. Many endeavors are tried to speed up comprehensive utilization of fish blood and extent its application prospect. Achieving comprehensive utilization may not only reduce environmental pollution, but also increase the economic efficiency of enterprises effectively. In this paper, using modern biotechnology and optimizing conditions of the related process, an efficient and easily scaled up way to purify superoxide dismutase (SOD) and heme from Tilapias blood was proposed. As well as the properties of SOD and heme were studied. This research is aim to provide theoretical evidence for maki