黄鳝蛋白酶分离纯化、性质与应用研究-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

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黄鳝置自酶的分离纯化、性质且应用研究 黄鳝置自酶的分离纯化、性质且应用研究 缩略词表 缩略词 英文今称 Acr acrylamide AP ammonium persulfata ATEE N-Acetyl-L-tyrosine elhyJ esler monohydrale BAEE benzoyl-L-arginine ethyl esler HcI BrAc bromacelic acid Bis N ,N-Melhylenebisacrylamide OEAE dicthylaminoethyl cellulose OTT dilhiothreitol IAc iodoacetic acid LAS chemical reagent NBS N-bromosuccinimide PAGE polyacrlamide gel electrophoresis PCMB p-chloromercuribenzoale PMSF phenylmethlsulfonyl fluoride SOS sodium dodecyl sulfale 虫玉皇垒 丙烯联胶 过硫酸馁 N-乙酌-L-酶氨酸乙酣 N-苯甲酸-L-精氨酸乙醋 澳乙酸 甲叉)1)(丙烯联胶 二乙胶乙基纤维素 二疏基苏糖醇 腆乙酸 十一炕基苯E黄殴纳 N-澳代玻础 M.lY.胶 聚丙烯歇胶凝胶电泳 对氯亲王在 甲自费 苯甲基磺酸氟 十 炕基硫E量纳 SOSsodium dod四yl sulfale polyacrlamide eleclrophoresis SOSc聚丙烯酌肢凝胶电泳 TCA trichloroacelic acid TEMED N,N ,N ,N -tetramelhylethylendiamine TNBS 2,4,6-lrinitrobenzene-sulfonic acid Tris trishydroxymethylaminomethane  三氯乙酸 N ,N,N ,N- 囚甲基乙一自主 三硝基苯破自主 二接甲基氨基甲炕 50 黄鳝蛋白酶的背离纯化、性质且应用研究 黄鳝蛋白酶的背离纯化、性质且应用研究 黄鳝蛋白酶的分离纯化、性质及应用研究 摘要 专 业:生物化学与分子生物字 指导教师:唐云明 研究方向:酶与酶工程 研究生江信红 黄鳝 CMonoplerus albus Zuiew) 肉质鲜美、营养丰富,深受消费者喜爱,并在深加工和 保健品开发上乓有极大的开发潜力。由于黄鳝供需矛盾日益突出,其人工繁殖以及人工养殖 尤为重要。黄鳝是典刻的肉食性鱼类,蛋白酶是其最主要的消化酶,对蛋白酶的相关研究, 不仅对黄鳝的摄食性能和消化特点等方面研究有重要帮助.同时可对黄鳝配合饲料的科学 化、系列化提供重要理论依据。因此,本实验对于黄鳝的人 l 饲养,提高产量,节约成本, 解决日益突出的供需矛盾有重要意义。 蛋归酶是目前 业用酶的主要酶制剂之一,在食品、日化、医药等方面应用广泛。在人 们倡导绿色、环保、天然消费的今天,含磷洗涤剂和 1食品化学添加剂逐渐被禁用,这给夭然 酶制剂的使用带来更太空间。而目前,天然蛋白酶的来源非常有限,动物蛋向酶主要是猪姨 蛋白酶.由于资源短缺,现仅用于医药。鉴于蛋白酶的应用 f 泛且来源有限,开发新的蛋 向酶源迫在眉睫。 黄鳝内脏一直作为下脚料没有被 f良好利用,随着我国黄鳝养殖业的不断发展,产草不断 增加,按 lkg 鳝鱼 O.3kg 内脏计算,我国每年将产生 100 万吨左右的鳝鱼内脏,这样巨火的 资源如不回收利用,不仅造成资源浪费,更会污染环境。闵此,黄鳝内脏蛋自酶的研究可开 发新的蛋白酶源.有效解决蛋白酶制剂紧缺问题,同时更为黄鳝的综合开发提供新的途径。 本文主要从黄鳝肠道蛋白酶的分离纯化、性质和相关应用等方面进行了研究,现将结果 总结如r: 1.黄鳝蛋白酶的分离纯化 黄鳝肠道经1?馆水冲洗,组织绞碎,离心,正 醇脱脂,硫酸接盐析,沉淀溶解和 1透忻 得粗酶液.将粗酶液过 DEAE-琼脂糖离子交换柱层析,收集活性峰、透析、干燥浓缩。再 将所得样品经 Sephacryl S-200 凝胶柱层忻,收集活性峰.干燥后得蛋向酶纯品,将其进行 SDS和等电聚焦电泳.均显示为革一蛋白质条帘。 SDS和 Sephacryl S-200 测 得锺向酶分子量分别为 26KDa 和 25.5KDa ,等电聚焦电泳测得酶的等电点为6.20 蛋白酶的 活性回收率为 9.8% ,纯化倍数为245 倍。 2. 性质研究 由分离纯化得到蛋臼酶纯品后,测得其最适温度为 5SC ,混度在20C 到 40 C酶活性保 黄鳝量臼酶的分离纯化、性质且应用研究 黄鳝量臼酶的分离纯化、性质且应用研究 持稳定,在 50C条件下保温

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