绿原酸抗人皮肤成纤维细胞衰老的研究-临床医学(皮肤性病学)专业毕业论文.docxVIP

汕头 汕头大学医学院 2007 级临床医学（本硕连读）硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成 果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它 机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和 集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律 责任由本人承担。 作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文 被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文； 学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网 公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有 关规定和程序处理。 作者签名： 导师签名： 日期： 年 月 日 日期： 年 月 日 I 学位论文知识产权声明 本人在就读研究生期间所完成的学位论文以及相关结果，知识产 权归属汕头大学医学院。本人在毕业离校前会将有关的研究资料和结 果全部上交导师，离校后发表或使用学位论文或与学位论文直接相关 的学术论文或成果时，须征得导师及导师所在单位的同意，并要求署 名单位仍为汕头大学医学院。本人不得以本论文的研究成果申报研究 课题。导师和导师单位可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数 据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段进行保存、汇 编学位论文，可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。导师及 导师所在单位享有发表学位论文、申请成果和专利的权利。 注：保密的学位论文在解密后适用本声明。 研究生签名： 日期： 年 月 日 导师签名： 日期： 年 月 日 II 目 录 学位论文原创性声明 Ⅰ 学位论文知识产权声明 Ⅱ 目 录 Ⅲ 中英文缩写对照表 Ⅳ 中文摘要 Ⅴ 英文摘要 Ⅵ 第一章 前言 1 第二章 材料与方法 5 2.1 主要仪器5 2.2 主要试剂5 2.3 实验方法6 第三章 结果 14 3.1 人皮肤成纤维细胞的原代培养 14 3.2 人皮肤成纤维细胞衰老模型的建立 15 3.3 绿原酸对乙二醛诱导的细胞衰老的保护作用 19 第四章 讨论 24 4.1 成纤维细胞与皮肤衰老 24 4.2 AGES、乙二醛与皮肤衰老 24 4.3 建立细胞衰老模型25 4.4 绿原酸对成纤维细胞的保护作用 26 第五章 结论 28 参考文献 28 附录 1 文献综述32 附录 2 在读期间发表的论文 39 附录 3 个人简历40 致 谢 41 III 中英文缩写对照表 缩略词 英文名称 中文名称 AGEs Advanced Glycation Endoproducts 晚期糖基化终末产物 GO Glyoxal 乙二醛 AG Aminoguanidine 氨基胍 CGA Chlorogenic Acid 绿原酸 qRT-PCR quantitative Real Time -Polymerase Chain Reaction， 实时定量聚合酶链式 反应 FBS Fetal Bovine Serum 胎牛血清 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 PBS Phosphate Buffered Saline 磷酸盐缓冲液 MTT 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphen yltetrazolium bromide) SA-β-gal Senescence associatiated-β- galactosidase 噻唑蓝 衰老相关β 半乳糖苷 酶 INK4a Inhibitor of cyclin-dependent Kinase 4a 细胞周期蛋白依赖性 蛋白激酶抑制剂 4a pRB Retinoblastoma protein 视网膜母细胞瘤蛋白 IV 中文摘要 目的：利用乙二醛建立人皮肤成纤维细胞衰老模型，探讨绿原酸在乙二醛致 人皮肤成纤维细胞衰老中的保护作用。 方法：(一)取幼儿包皮组织进行人皮肤成纤维细胞的原代培养，并采用免疫 组化的方法以进一步证实。（二）用 MTT 法、β 半乳糖苷酶（SA-β -gal）染色 法和实时定量 PCR（qRT-PCR）法评价乙二醛及氨基胍对人皮肤成纤维细胞增殖、 SA-β -gal 阳性率及 p16INK4a mRNA 表达量的影响。（三）利用不同浓度的绿原 酸与乙二醛一起作用于人皮肤成纤维细胞， 采用 MTT 法初步筛选绿原酸适合作 用的浓度，然后再检测绿原酸加入后 SA-β -gal 染色阳性率和 p6INK4a mRNA 的 表达情况。 结果：(一)培养出人皮肤成纤维细胞，且免疫组化