两色金鸡菊茶饮对2型糖尿病胰岛素抵抗的预防作用及机制研究-生药学专业毕业论文.docxVIP

学校代码： 学校代码： 10023 学 号：B2012009019 博士学位论文 两色金鸡菊茶饮对2型糖尿病胰岛素抵抗的预防作用 及机制研究 Preventive effect and mechanism of Coreopsis tinctoria tea on insulin resistance of 2 type diabetes mellitus 所 院 中国医学科学院药用植物研究所 姓 名 姜保平 指导教师： 肖培根院士 导师小组： 肖培根许利嘉 学科专业： 生药学 研究方向： 代谢综合征的预防及辅助治疗 完成日期： 2015年05月 万方数据 目录中文摘要 目录 中文摘要 ．．i Abstract ． ． ． ．． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．． ． iii 前言 1 1．IR的历史回顾 ．1 2．IR在2型糖尿病中的地位和作用 ．2 3．IR与2型糖尿病并发症的关系 ．5 4．IR的发生机理 ．8 5． 肝脏胰岛抵抗在全身胰岛抵抗中的地位 13 6．IR的细胞模型和动物模型及评价 14 7。补充和替代医学与糖尿病及胰岛素抵抗 16 8．茶饮与IR及糖尿病 ．．17 9．两色金鸡菊茶饮 18 10．存在的问题与展望 18 11．本课题的研究内容、目的及意义 19 第一部分两色金鸡菊茶饮对高糖高脂饮食大鼠胰岛素抵抗预防作用的研究 22 1．实验材料 22 2．实验方法 25 3． 实验结果 34 4． 讨论 ．．46 第二部分两色金鸡菊化学成分的提取分离与结构鉴定 54 1．实验材料与方法 54 2．结构与解析 57 3．结果与讨论 ．63 第三部分HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立及两色金鸡菊单体化合物促进 IR．HepG2细胞糖吸收的活性筛选 70 1．实验材料 70 2． 实验方法 72 3． 实验结果 75 4． 讨{仑 。81 第四部分两色金鸡菊单体化合物马里苷改善HepG2细胞IR机制研究 ．83 1．实验材料 83 2． 实验方法 84 万方数据 3． 3． 实验结果 86 4． 讨论 ．．95 第五部分马里苷能通过激活AMPK通路抑制丙酮醛引起的PCI2细胞的凋亡 98 1．实验材料 ．．102 2．实验方法 ．．103 3．实验结果 j ．．109 4．讨论 119 全文总结 ．123 参考文献 125 缩略词表 ．146 个人简历 147 博士在读期间学术成果 148 至炙谢 ．．150 万方数据 中国医学科学院药用植物研究所博士学位论文两色金鸡菊茶饮对2型糖尿病胰岛素抵抗的预防作用 中国医学科学院药用植物研究所博士学位论文 两色金鸡菊茶饮对2型糖尿病胰岛素抵抗的预防作用 及机制研究 中文摘要 两色金鸡菊(Coreopsis tinctoria Nutt．)，来源于菊科(Asteraceae)金鸡菊属 (Coreopsis)，原产于北美，土著印第安人用来治疗腹泻、内部疼痛、出血、催吐。 在葡萄牙也有每天喝两杯热两色金鸡菊茶用于控制糖尿病的传统。两色金鸡菊是一 种养生、保健的天然植物，载于《新华本草纲要》，味甘，性平，归肝、大肠经， 具有清热解毒，化湿止痢之功效。两色金鸡菊的主要成分是黄酮类成分，目前，尚 未有报道显示，饮用两色金鸡菊茶饮能改善胰岛素敏感性和并影响肝脏葡萄糖代 谢。本论文的目的是研究两色金鸡菊茶饮对2型糖尿病胰岛素抵抗的预防作用及机 制研究。 本研究从代谢的角度，探讨两色金鸡菊茶饮对高糖高脂饮食诱导的肝脏胰岛素 抵抗是否具有预防作用及其干预的相关代谢通路。结果显示：两色金鸡菊茶饮能显 著弱化高糖高脂饮食干扰的10条代谢通路，很好的抑制高糖高脂饮食诱导的糖异 生关键蛋白G6Pase和PEPCK及三羧酸循环关键蛋白CS、SDHB表达水平的升高 和SDHA的下降。另外，两色金鸡菊茶饮还能有效的预防高糖高脂饮食引起的三羧 酸循环关键蛋白CS、DLST和SDHA mRNA表达的改变。 利用正相硅胶、反相MCI树脂柱色谱法及Sephadex LH．20凝胶色谱法对两色 金鸡菊头状花序进行了分离；利用1H．NMR、13C—NMR等技术对所得化合物进行结 构鉴定。从两色金鸡菊中共分离得到15个化合物，鉴定了11个，分别是：木犀草 素、奥卡宁、3’，4’，8一三羟基黄酮．7．D．伊吡喃葡萄糖苷、槲皮素、异奥卡宁．7．O-fl-D． 吡喃葡萄糖(黄诺马苷)、马里苷、2S．3’，5’，7．三羟基二氢黄酮、D一谷甾醇、豆甾醇、 紫铆花素和豆甾醇．3．D一∥．D吡喃葡萄糖苷。 建立体外高糖诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗模型，并利用该模型对两色金鸡 菊化合物进行筛选，筛选结果显示黄诺马苷(247．0 mg)和马里苷(120．5 rag)具 有较好的预防高糖诱导胰