宽礁膜抗凝血活性多糖及其寡糖的制备和结构研究-药物化学专业毕业论文.docxVIP

宽礁膜抗凝血活性多糖及其寡糖的制备和结构研究学位论文完成日期 宽礁膜抗凝血活性多糖及其寡糖的制备和结构研究 学位论文完成日期 指导教师签字 答辩委员会成员签字 广一一 独创 独创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得一 (注： 垫遗直基丝重要签墨4直明鳆!奎拦卫窒2或其他教育机构的学位或证书使用过的 材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说 明并表示谢意。 学位论文作者签名： 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人 授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息 研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公 众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：巷白啊曼、 导师签字： 签字日期：切1 1年主月2 7 Et 签字日期：列f年歹月≥1日 宽礁膜抗凝血活性多糖及其寡糖的制备和结构研究 宽礁膜抗凝血活性多糖及其寡糖的制备和结构研究 摘要 ．宽礁膜是我国重要的经济海藻之一，隶属于绿藻门，绿藻纲，石莼目，礁膜 科，礁膜属。目前，宽礁膜在我国人工育苗和栽培己获成功。本论文以我国人工 养殖宽礁膜为研究对象，采用各种色谱分离技术，获得高抗凝血活性的宽礁膜多 糖，采用化学和现代波谱方法对其结构进行研究，并对结构新颖的抗凝血多糖进 行降解研究，建立可控酸降解法制备宽礁膜低分子量多糖片段及其寡糖的方法， 通过核磁共振波谱和质谱技术，对获得的低分子量的糖基片段和寡糖的结构进行 研究，并研究各种低分子量糖基片段对抗凝血活性的影响。研究结果如下： 1人工栽培宽礁膜藻体经冷、热水提取得到两种多糖冷水提多糖和和热水提 多糖，相对于干燥藻体的得率分别为9．56％和39．1％。采用离子交换色谱和凝胶 渗透色谱对热水提多糖进一步纯化，主要得到三种多糖MAS、MBS和MCS。 通过化学方法对理化性质进行测定，结果表明，MAS、MBS和MCS总糖含量 分别为74．1％、68．1％和65．3％；硫酸基含量为26．1％、28．5％和31．8％；糖醛酸 含量为4．44％、3．94％和3．27％；蛋白质含量较低。高效凝胶渗透色谱法测得MAS 分子量较高为512．5 kDa，而MBS和MCS分子量较低，分别为58．4 kDa和48．5 kDa：气相色谱法测得MAS、MBS和MCS以鼠李糖为主，还含有少量的葡萄糖、 木糖、甘露糖和半乳糖等。经红外光谱、脱硫反应、甲基化反应和核磁共振波谱 (1D，2D NMR)分析表明，MAS、MBS和MCS结构比较相似，主要由 [一3)-q—L-Rhap一(1_】、【一2)一Q—L—Rh印一(1_】和【_2，3)·a—L—Rhap一(1_】组成，但摩 尔比例不同，硫酸基团主要位于【--,3)．a．L．Rh印一(1_÷】的C．2位和 【一2) 0t L Rhap．(1_】的C．3位。多糖MAS、MBS和MCS中主要含有四种硫酸 鼠 李 二 糖 结 构 单 元 ：【．固枷岣咆So从lqM广R州 【_0如d刷h稚S0以1—2)-硝广Rh妒叫 、卜÷3№-I乐岣叹l—2M广Rh固郑SQ沪1 和 【-一3如．I水蛔犯SO从1—2，3知-I广Rh妒叫。通过APTT、PT和TT对多糖MAS、MBS 和MCS的抗凝血活性进行评价，得到抗凝血活性较好结构新颖的硫酸鼠李聚糖。 2采用硫酸降解的方法，将多糖MAS降解为不同分子量的多糖。通过相对 2采用硫酸降解的方法，将多糖MAS降解为不同分子量的多糖。通过相对 黏度法、高效薄层色谱法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法和高效凝胶渗透色谱法对降解 条件进行优化。采用0．1 mol／L H2S04在40℃水解75 min和80℃水解60 min 对多糖MAS进行降解，制各得到分子量在405．0--5．1 kDa的七种多糖 (MASI～MAS7)。研究表明，七种多糖的理化性质、单糖组成和红外光谱特征 均与母多糖MAS相似。以抗凝血活性高且温和的低分子量多糖MAS5为代表， 通过甲基化反应和lD，2D NMR分析表明，MAS5由【-，3) 0t L Rhap．(1一】、 【--,2)一a．L—Rhap．(1_】和【_2，3)一a-L—Rhap一(1_】组成，三者摩尔比为4：1：1，硫酸基 团位于【一3)一a-L-Rha