三氧化二砷对多发性骨髓瘤细胞株作用及机理的研究-内科学(血液病)专业论文.docxVIP

浙讧土学J重士学位论文三氧化二砷对多发性骨髓瘤细胞株 浙讧土学J重士学位论文 三氧化二砷对多发性骨髓瘤细胞株 作用及机理的研究 浙江大学医学院 内科学(fin液病) 2001级硕士研究生 郭振兴 导 师 金洁教授 摘 要 三氧化二砷(AS203)是我国率先应用于治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的 药物，研究表明它能降解染色体t(15：17)的PML／RAR。融合蛋白，对APL细胞既 能诱导凋亡，又能促进分化。研究发现，AS203还具有诱导非APL的肿瘤细胞凋亡 的作用，包括非APL白血病、淋巴瘤及实体肿瘤等。最近Bahlis等报道AS203用于 治疗MM取得一定疗效，但其作用机理尚不太清楚。本研究应用AS203作用多发性 骨髓瘤(MM)细胞株KIvl3，以探讨其对骨髓瘤细胞的具体作用机制，为临床开拓 新的抗MM药物提供理论依据。 我们以人多发性骨髓瘤细胞株KM3作为研究对象，应用锥虫蓝拒染法观察 AS203对KM3细胞的生长抑制情况。结果发现，0．5～6．0 1．t M的AS203作用Kid3细 胞后，可明显抑制其生长活力，且随着浓度的增大，抑制率逐渐增加，具有明显的 量效关系。 为探讨AS203对KM3细胞的生长抑制机理，我们采用形态学(光镜，透射电 镜)，DNA电泳观察AS203诱导KM3细胞凋亡；结果显示，AS203作用KM3细胞 48小时后，透射电镜下观察，自1 p M开始出现凋亡变化，到6H M时出现典型的 凋亡特征：细胞体积缩小、核固缩、染色体凝集、新月体和凋亡小体等。DNA凝胶 晰津大学硕士学位论文电泳中，KM3细胞在6p 晰津大学硕士学位论文 电泳中，KM3细胞在6p MAS203作用48h后出现典型的凋亡梯状条带(DNA ladder)，以上结果显示AS203具有诱导骨髓瘤细胞凋亡的作用。为探求细胞凋亡 的可能机理，我们用流式细胞仪检测细胞周期的变化；TRAP—PCR法检测AS203 作用KM3细胞后的端粒酶活性变化；半定量RT—PCR法检测端粒酶逆转录酶(hTERT mRNA)及端粒重复序列结合因子2(TRF2 mRNA)的表达水平。FCM检测结果显示， AS203作用KM3细胞48小时后，随着药物浓度的逐渐加大，细胞G1期逐渐减少， G2期逐渐增加，s期变化不大，细胞被阻滞于G2期。提示细胞周期的阻滞可能 是其诱导凋亡的一个机制。 端粒酶活性的检测结果表明在AS203诱导KM3细胞凋亡的过程中，可以明显 抑制端粒酶的活性。0．figM和1．0pM AS203作用KM3细胞24和48小时后，细胞 端粒酶活性均较对照明显下降。基因转录水平的结果显示，不同浓度AS203作用 K／v13细胞72小时后，随着浓度的增大，hTERTmRNA表达水平逐渐下降(P O．05)，与端粒酶的变化趋势相一致。有趣的是，随着浓度的加大，TRF2 mRNA的 表达水平也逐渐下调(P0．05)，提示与凋亡的发生程度密切相关。 综上所述，我们认为：①AS203可以抑制骨髓瘤细胞株KM3细胞的生长，其 抑制作用呈量效关系；②AS203可以诱导KM3细胞凋亡，其可能是抗MM的重要机 制；@AS203可以阻滞KM3细胞于G2期，我们推测有可能由于细胞周期的阻滞， 进而导致细胞凋亡：④AS203可下调KM3细胞端粒酶逆转录酶hTERT mRNA表达水 平，进而抑制端粒酶活性。这可能是As203致MM细胞凋亡的机制之一；⑤在诱导 凋亡的过程中，AS203可以下调KM3细胞端粒重复序列结合因子TRF2 mRNA的表 达水平，其与hTERT mRNA表达水平的一致降低可能是预测细胞凋亡的一个重要 指标。 关键词：AS203 凋亡多发性骨髓瘤细胞周期 端粒酶hl、ERT TRF2 浙江大学J重士学位论文The 浙江大学J重士学位论文 The study of arsenic trioxide Oil multiple myeloma cell line and its mechanisms Department of Hematology,Internal Medicine， Medical College，Zhejiang University Postgraduate： Guo Zhenxing Supervisor：Prof．JIN Jie Abstract Arsenic trioxide(AS203)is a novel chemotherapy agent tO succeed in treating acute promyelocytic leukemia(APL)firstly in China．The main mechanism of AS203 is reported that it can degrade c