三株DBP降解菌的筛选及其降解特性的相关研究-生物工程专业论文.docxVIP

原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包 含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的 学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论 文中作了明确的说明。 作者签名：三』善车_ 日期：盟年』月上日 学位论文版权使用授权书 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学 位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和 借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手 段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国 学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。 作者签名：斟导师签名盈同期：址年-￡月一同 硕士学位论文 硕士学位论文 摘要 摘要 邻苯二甲酸酯(PAEs)是人工合成的一种工业上非常重要的有 机化合物，它被广泛应用于生产塑料等产品的增塑剂，同时也用于食 品的包装材料、婴幼儿玩具、化妆品和家具等行业。由于PAEs大量 生产和广泛使用，PAEs已经成为环境中一种广泛存在的污染物。PAEs 在环境中可以通过光解、水解和微生物降解去除，而微生物降解以其 无二次污染和降解速度快的优点成为了处理PAEs污染的主要途径。 本论文从桂林和珠海两地采集三个样品，分离得到了三株能够以 PAEs为唯一碳源和能源的菌株，分别命名为JDC．4l、JDC．49和 JDC．36。根据分子生物学鉴定，JDC一41、JDC．49和JDC一36初步鉴 定属于苍白杆菌属、土壤杆菌属和节杆菌属。分别对其降解条件、降 解能力、降解动力学、混合酯的降解、邻苯二甲酸3，4．双加氧酶基因 的克隆和邻苯二甲酸3,4．双加氧酶基因差异表达等方面进行了研究。 获得的研究结果如下： (1)首次分离出能够以DBP为唯一碳源和能源的苍白杆菌，命名 为JDC．41，其对DBP的最佳降解温度和pH分别是30℃和7．0。底 物多样性结果显示，巾C。41只能够利用一些侧链相对较短的PAEs， 而不能够利用一些侧链相对较长的PAEs。降解动力学实验表明，随 着DBP浓度的增加，JDC．41对DBP降解的半衰期会逐渐增加，并 且在48小时之内能够降解90％左右的DBP(500mg／L)。混合酯的降 解表明，DMP能够对DBP的降解有一定的抑制作用，而且DMP和 DBP的降解也不能够诱导JDC．41对DOP的降解。底物诱导实验结 果显示，当JDC一41经过DBP诱导以后能很快地降解DBP，而没有 经过DBP诱导过的JDC．41能够观察到一个明显的延滞期，而且降解 速度相对缓慢。 (2)首次分离出能够以PAEs为唯一碳源和能源的土壤杆菌，命名 为JDC．49。该菌株对DBP的最佳降解温度和pH分别是30℃和8．0。 底物多样性实验表明，该菌能够很好地利用PA却不能够利用PA的 两个同分异构体IPA和PTA，并且对侧链较长和较短的PAEs都有一 定的降解能力。降解动力学实验表明，当DBP浓度不大于100mg／L 时JDC．49对DBP的降解符合一级动力学方程，半衰期为10．4小时 左右。混合酯降解发现，在混合酯中DMP能够很快地被降解，并且 其对DBP的降解一开始有一定的抑制作用，但是在48小时内总体表 硕士学位论文 硕士学位论文 摘要 现为促进作用。JDC一49对DBP的降解途径是DBP到MBP，MBP到 PA，然后再开环进行后续的降解。 (3)从珠海红树林土壤中分离出一株能够能够以PAEs为唯一碳 源的菌株，鉴定其为节杆菌并命名为JDC一36。对其富集过程中各个 富集物进行了群落多样性分析，发现随着富集次数的增加，富集物中 群落多样性有明显的下降，而且JDC．36在富集物中所占的比例越来 越大。JDC．36的最佳降解温度和pH分别是30℃和9．O。和JDC-49 类似的是该菌株也不能够利用PA的两个同分异构体IPA和PTA，并 且只能够降解一些侧链相对较短的PAEs而不能降解侧链相对较长的 PAEs。混合酯降解发现JDC．36优先利用DBP而不是侧链更短的 DMP，并且经过DMP和DBP诱导以后的JDC．36仍然不能够利用 DOP。另外，从JDC．36中克隆出了邻苯二甲酸3,4．双加氧酶基因， real．time PCR证明该基因与DBP的降解有一定的相关性。 关键词： 生物降解，邻苯二甲酸酯，代谢途径，邻苯二甲酸3,4．双 加氧酶基因，real．time PCR Ⅱ 硕士学位论文 硕士学位论文 ABSTRACT ABSTRACT Phthalate a