硫酸皮肤素和硫酸乙酰肝素的制备及其抗血栓相关活性协同作用分析-微生物与生化药学专业论文.docx

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研 究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明 的法律责任由本人承担。 论文作者签名：二弛 日 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存论文和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：茎互玺巫导师签名 山东人学硕十学位论文目 山东人学硕十学位论文 目 录 摘要 ．IX Abstract ． ． ．：_(、√， 符号说明 X)(¨ 第一章前言 ．．1 1血栓的形成 ．1 1．1凝血级联反应 2 1．2血小板与血栓形成 一4 1．3血液状态与血栓形成 ．4 1．4纤溶系统与血栓形成 5 2抗血栓药物 6 2．1抗血小板药 ．7 2．2抗凝血药 ．7 2．3溶栓药 一8 3肝素及其提取副产物 ■ 9 3．1肝素 ．9 3．2硫酸乙酰肝素／硫酸皮肤素 12 3．3硫酸乙酰肝素和硫酸皮肤素抗栓协同增效作用 14 4本课题已有的研究基础 ．1 7 5本实验拟解决的问题 一仃 第二章猪肠黏膜类肝素的制备与分离纯化 ．．18 1材料 1 8 1．1试剂 ．．18 1．2仪器 ．．1 8 2方法 1 8 2．1 HPND除蛋白 ．1 9 2．2 HPND氧化除杂质 ．22 2．3 HPND和SLDX各组分的分离 一22 2．4 QFF分离HS组分 26 山东人学硕士学位论文2．5脱盐 山东人学硕士学位论文 2．5脱盐 ．27 2．6 HPND和SLDX组成分析 ．27 3结果 ．27 3．1 HPND除蛋白 27 3．2 HPND氧化除杂质 28 3．3 HPND和SLDX各组分的分离 29 3．4 QFF分离HS 31 3．5脱盐 一31 3．6 HPND—HS和SLDX-HS组成分析 ．32 4讨论 ．．． 32 4．1糖蛋白的酶解 32 4．2脱蛋白 一33 4．3 HPND和SLDX各组分的分离 33 4．4脱铜 34 5本章小结 34 第三章HPND的结构与理化性质研究 35 1材料 35 1．1试剂 35 1．2仪器 ．35 2方法 35 2．1比旋度的测定 ．35 2．2葸酮比色法确定HS0 ．35 2．3铜含量测定 ．36 2．4硫酸根／羧酸根比值测定 37 2．5醋酸纤维素薄膜电泳 ．．37 2．6 HS／HP双糖分析 ．．38 2．7 DS双糖分析 ．40 2．8分子量的测定 ．．42 2．9核磁共振图谱测定 ．42 ¨ 山东大学硕十学位论文3结果 山东大学硕十学位论文 3结果 42 3．1比旋度的测定 42 3．2葸酮比色法确定HS0 ．43 3．3火焰原予分光光度法测样品铜含量 44 3．4硫酸根／羧酸根比值测定 ．45 3．5醋酸纤维素薄膜电泳 一46 3．6 HS／HP双糖分析 46 3．7 DS双糖分析 49 3．8分子量的测定 ．50 3．9核磁共振图谱分析 一51 4讨论 52 4．1 HS0组分分析 ．52 4．2样品铜含量 一52 4．3 HPND组分分析 ．53 4．6双糖分析 53 5本章小结 。54 第四章HPND抗FXa、抗F II a活性及促脂蛋白酯酶和组织纤溶酶原激活剂释 放活性 ．56 1材料 56 1．1实验试剂 ．56 1．2实验仪器 56 1．3实验动物 ．56 2方法 56 2．1抗F X a活性测定 ．56 2．2抗II a活性测定 58 2．3 HPND脂蛋白酯酶释放活性测定 59 3结果 61 3．1抗F X a活性和抗F II a活性 ．61 3．2 HPND促脂蛋白酯酶释放活性测定 。63 山东人学硕士学位论文3．3 山东人学硕士学位论文 3．3 HPND促t-PA释放活性测定 65 4讨论 67 4．1抗FXa活性和抗F II a活性 ．．67 4．2 HPND促LPL释放活性 ．．67 4．3 HPND促t-PA释放活性 68 5本章小结 ．．68 第五章HS与DS促进LPL和t-PA释放活性协同增效作用研究 69 1材料 69 1．1实验试剂 一69 1．2实验仪器 ．．69 1．3实验动物 69 2方法 69 2．1 HS与DS分别促进脂蛋白酯酶释放活性的研究 69 2．2 LPL和t-PA含量测定 ．70 3结果 71 3．1 HS与