利用生防木霉基因提高水稻抗病性研究-植物病理学专业论文.docx

摘要水稻纹糖痍(Rhizoctoniasolani)耪稻瘦瘸(Magnaporthegrisea)是2转严 摘要 水稻纹糖痍(Rhizoctoniasolani)耪稻瘦瘸(Magnaporthegrisea)是2转严 重危害我国水稻生产的冀麓病害。由于纹樯病挠源缺乏饺该疲静抗瘸育种工作进 展缓慢，而稻瘟菌小种的复杂多样，常使育成的抗病品种在短期内失去抗性。利 用外源几丁质酶基因和葡聚糖酶基因提高水稻对这两种病害的抗性被认为是一 静有效鳓途径。在本实验室的翦期_I作中，将来源予生防嶷藏哈茨本霉 (静缸幻derma harzianum P1)酌囊凌凡丁囊懿蒸嚣基鑫缰痔蠢ThEn-42(ech42) 导入水稻，该基因受CaMV 35S启动子调控，在水稻中组成型表达，经初步鉴定 转基因水稻To代表现堡直了对纹枯病的抗性。 本研究对上述基因在水稻中的遗传稳定性进行了检测，并对转熬因水稻后代 进行撬纹糖痍巍稻瘟病薅逸。为进一步提裹承穰对绞辏痍稆疆癌痰戆狡性，采曩 Aetl麓动予取代CaMV 35S璃动子，并稍麓3羊中本霉麓壁降解酶蕊因(ech42、 nagTO和gluc78)转化水稻，以期通过在水稻中高水平表达几丁质酶和葡聚糖酶 活性，获得高抗纹枯病和稻瘢病的转基因水稻株系，为水稻的抗瘸遗传育种提供 基础专孝辩。 主燹结粟热下； 1．对弛砌一钳基因的转繁因水稻后代进行PCR撩定和潮霉素抗性黢定，结果表 明大约70％的Tl代转撼因株系符合3：1(阳·陡：阴性)的分离比，寝明确幽一幻 在这魑株系中有单个攒入位点；大约20％的Tl代株系分离比符合t5：t，表明 这麓拣系含毒2令整合缎点。透铎熬分下l代潦霉素菝瞧蓬拣遴譬亍Southern杂 交撩定，结果证实外源蒸因已经稳定速传给Tl代。对部分T2代株系进行潮 霉索抗性鉴定和PCR燎定，结果表明砌Eh，档已经稳定遗传给T2代植株。 2．检测了Tl代转ThEn。42植株对水稻纹枯病(Rhizoctonia solani)和两个分别 瘸予A群和B群如稻瘢瘸(Magnaporthegrisea)小辩的抗性，30％栋系表瑷 了对这两种瘸害抗瞧水平不同程度熬援离。有7个株系匏抗魏与对照相篦舂 很擞箸的提高，其中Tp64表现对两个稻瘟病小种完全免疫。澍Tp64的T2 代缝合植株进行稻瘟病抗性鉴定，转基因檄株仍然表现对所检测的2个稻瘟 珏 蕴小种完全免疫，但是浚株系对纹桔病的抗性无明显提高。这盛缩果表明内 蕴小种完全免疫，但是浚株系对纹桔病的抗性无明显提高。这盛缩果表明内 切几丁质酶基因ThEn。42已经在受体植物中准确表达，并且在提高水稻抗病 性方丽起了重要作用。但并末获得对2种瘸原都具有高度抗性的植株。 3．为邀一步提高本稻辩纹糖瘸和稻瘟瘸盼挠蛙，利用来滚予啥茨木霉 (Trichodermahazianum)P1菌株的3个麓壁降解酶基霾ech42、na970与gluc78 构麓了包括不同基因及其所有组合的7个檎物表达载体，每个揍因受独立的 Actl启动子调控。构建的7个载体不仅包含所有组合的3个外源基因，而且 具街双元载体本身携带的棚甲基因与Gus蒸因，从而为研究不阏T—DNA长 度、不蘑基霾缝合与不嬲基因接确方淘对穗躲遗抟转纯效率以及钤潺基霆在 转耩阂植株中表达的影响提供了一套比较完熬的材料。 4．利用本实验室的农杆菌离效转化体系，将3种胞壁降解酶基因ech42、na970 与gluc78所有组合的7个载体分别转入粳稻黯种石狩白毛(OryzasativaL ssp． Japonica cv．Ishikari．shiroge)中，共获褥霉生_{壹橡l 800余株。对部分再生檀 椿滋行了PCR检测和Southern杂交检测，诞明96％的檀株携带有辨源基函 中的懋少一个基因，80％以上的植株整合有完整的外源基因片断，而且多数 基阑在受体植株中有单个整合位点。对不同裁体的分化率和绿茵率进行分析， 发魄隧藿T．DNA区长度的增大，分化率和绿茁率都有降低的趋势。携带 glue78纂霞懿载矮导数分亿率、绿萤率戳及分化速度夔显著蹲甄。 5．转旗因再生植株移栽到土壤中以后，不同载体的转化植株成活率和正常植株 比例明显不同。转化单个gluc78基因的植株成活率和正常植株比例最低，在 所有携带gtuc78基因的载体的转化植株中都有部分植株出现不同程度的矮化 瑷象，这穆檀榇款时冀巍寒接秘任谤病豢憝。凌援下窭褒揭色斑点，不§￡撞穗、 结实，所检测豹矮化德株中都具有较离水平的8．1，3一葡聚糖酶活性，两栋高 基本正常的植株p*1，3．黼聚糖酶活性较低，可见gluc78严重影响了水稻的生 长。转化ech42基因的水稻出现生长延缓现象，但是并不影响株高和结实。 转化藏体上其它外源綦闲的存在会女I弱gluc78或ech42对植株生