冷水鱼肠道产低温酶菌株的分离鉴定及其酶学性质的研究-食品加工与安全专业论文.docxVIP

Isolation and Verification of Strains Producing Cold-active Enzymes from the Intestinal Tracts of Cold-water Fish and Study on Enzymatic Properties A Dissertation Submitted to Shihezi University In Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Agriculture By Zhang jian-rong (Food processing and security) Dissertation Supervisor: Prof. Ni yong-qing 学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除 文中已经注明引用的内容外 ，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究 做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文版权授权书 本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主 管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于赢利目的的少量复制并允许论 文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据进行检索。有权将学位论文的标题 和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。 冷水 冷水鱼肠道产低温酶菌株的分离鉴定及其酶学性质的研究 I I 摘 要 目的：工业生产和环境修复等领域对低温酶的需求量越来越大，而目前能够应用于实际生产的低温 酶资源却相当有限，这就需要大量开发低温酶资源来满足各种生产的实际需求。近年来国内外学者 对产低温酶的微生物研究主要集中在地球两极、深海、冰川、冻土、雪线以上等冷环境中，从冷水 鱼肠道中分离产低温酶菌株的研究报道较少。与地球两极、深海、冰川、冻土及雪线以上地域的环 境相比，冷水鱼肠道微环境有着天然厌氧、营养物质丰富等特点。从工业生产和环境修复实际需求 来看，从冷水鱼肠道中筛选分离优良产酶菌株更具有实际应用的价值。经过本次研究，期望能够从 不同冷水鱼肠道中筛选到产低温酶的优良菌株，以丰富低温酶资源。 方法：本研究依托新疆独特的地理环境，通过纯培养法分离赛里木湖和阿勒泰额尔齐斯河流域冷水 鱼肠道中的产酶菌株，并测序研究其系统发育多样性。从纯培养分离的产酶菌中筛选最适生长温度 较低、水解圈较大的产酶菌株进行发酵复筛，选出产低温酶的优良菌株并对其酶学性质进行研究。 结论： ①根据菌落形态、颜色、细胞形态，初步从采自赛里木湖和阿勒泰额尔齐斯河流域的冷水鱼肠 道中筛选到了 50 株产酶菌，其中 15 株是酵母菌。采自阿勒泰额尔齐斯河流域的冷水鱼肠道中共分 离到 39 株产酶菌，其中从丁鱼岁（Tinca tinca L.）肠道中分离到 12 株细菌，9 株酵母菌；江鳕（Lota lota L.）肠道中分离到 3 株细菌，3 株酵母菌；五道黑（Perca fluviatilis L.）肠道中分离到 5 株细菌； 红眼（Scardinius erythrophthalmus L.）肠道中分离到 1 株细菌；银鲫（Carassius auratus gibelio Bloch） 肠道中分离到 6 株细菌。从采自温泉县的冷水鱼肠道中共分离到 11 株产酶菌，其中七彩鲑（Salvelinus fontinalis Mitchill）肠道中分离到 7 株细菌，3 株酵母菌；高白鲑（Coregonus peled Gmelin）肠道中 仅分离到 1 株细菌；金鳟（Oncorhynchus mykiss var Walbaum）和虹鳟（Oncorhynchus mykiss Walbaum） 肠道中没分离到产酶菌株。可见赛里木湖和阿勒泰额尔齐斯河流域冷水鱼肠道中可培养产酶菌株数 量较少。 ②本次研究所分离的 35 株产酶细菌隶属于 6 个系统发育类群，其中假单胞菌属(Pseudomonas)14 株、气单胞菌属(Aeromonas)3 株、沙雷氏菌属(Serratia)11 株、单胞菌属(Stenotrophomonas)5 株、马 赛菌属(Massilia)1 株、黄杆菌属(Flavobacterium)1 株。15 株酵母同源性很高，全部隶属于掷孢酵母 属(Sporobolomyces)。从分子鉴定结果来看，本次研究分离获得的产酶菌株同源性较高。 ③35 株细菌全部能够分泌胞外蛋白酶，其中有 10 株能够产生复合酶。在产复合酶的菌株中， 菌株 P-Y-4、P-J-1、P-D-9、P-D