课件：岳斌细毛羊人工授精技术.ppt

羊精子活力检查的程序 载玻片预温 精液稀释 取样检查 镜检 活力估测 活力记录 将恒温加热板放在载物台上，打开电源并调整控制温度至37℃，然后放在载玻片上 将生理盐水与精液等温后，按1:10稀释 取10ul放在预温后载玻片中间，盖上盖玻片 用200倍和400倍观察 判断视野中前进运动精子占的百分率 按密、中、稀级制评分和记录 概念：单位体积精液中所含的精子数。 表示方法:个/mL，或亿/mL。 精子的密度检查 精子密度 20～30亿/mL。 精子密度的测定方法 精子密度计数板(器)简介 精子计数室长宽各1mm、面积1mm2 、高度0.1mm、体积0.1mm3 由双线或三线组成25个(5X5)中方格 每个中方格内有16个小方格(4X4)，共计400个小方格 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 精子计数室及一个中方格 精液稀释 将精液注入计数室前必须对精液进行稀释,以便于计数。 稀释的比例根据动物精液的密度范围确定 稀释方法:用5～25ul移液器和100～1000ul移液器,在小试管中进行组合不同的稀释。建议稀释比例为200倍，5ul原精液+3%氯化钠1000ul。 稀释液:3%氯化钠溶液,用以杀死精子,便于计数。 精液注入计数室 将洁净的计数板放在载物台上固定好,盖上干净的盖玻片 取25ul稀释后的精液,将吸咀放于盖玻片与计数板的接缝处 缓慢注入精液,使精液依靠毛细作用吸入计数室 共有两个对称的计数室 注意：让稀释后的精液通过毛细作用自行吸入！ 用吸管稀释后精液注入计数室 用移液器注入精液 精子计数 将计数板固定在显微镜的推进器内，用100倍放大找到计数室，再用400倍找到计数室的第一个中方格。 计数左上角至右下角五个中方格的总精子数，以精子的头部为准，依数上不数下，数左右不数右的原则进行计数格线上的精子。 进行精子计数的中方格数可以是四角一中心共5个中方格 也可以是从左角到右下角五个中方格 以图示次序计数，精子的头部为准，依数上不数下，数左不数右的原则进行计数格线上的精子。白色精子不计数 羊精子密度测定程序 放计数板 于载物台上 取样稀 释精液 精液注入 计数室 镜检 精子计数 密度计算 计数板和盖玻片一定要清洁 取500ul 3%氯化钠于小试管中,加入5ul原精液,混合均匀 取25ul小心地从计数板与盖玻片的接缝中加入,使其自行吸入计数室中 用100倍和400倍观察 计数五个中方格的总精子数,计数以头部为准,在格线上的数上不数下,数左不数右 精子密度= 5个中方格总精子数×10×1000 × 100 染色剂 0.5克龙胆紫用20ml酒精助溶，加水至100ml，过滤至试剂瓶中备用。美兰、纯兰或红墨水。 畸形率检查 稀释 稀释液0.9%NaCl，羊:1:20。 抹片 左手食指和拇指向上捏住载玻片两端，使载玻片处于水平状态，取10ul稀释后的精液滴至载玻片右侧。右手拿一载玻片或盖玻片，使其与左手拿的载玻片呈向右的45度角，并使其接触面在精液滴的左侧。将载玻片向右拉至精液刚好进入两载（盖）玻片形成的角缝中，然后平稳地向左推至左边。抹片后，使其自然风干。 固定 在抹片上滴95%的酒精数滴，固定4分钟，甩去多余的酒精。 染色 将载玻片放在用玻璃棒制的片架上，滴上0.5%的 龙胆紫或其它染色剂5～10滴，5分钟后，用洗瓶或自来水轻轻冲去染色剂， 甩去水分凉干。 检查畸形率 将载玻片放在400或640倍的显微镜下进行观察,共记录若干个视野100～200个左右的精子。 畸形率种类 头部膨大、头部小于正常、双头、头部不完整、 尾部折回、尾部卷曲、尾部套索、双尾、断尾、有 近端原生质小滴。 双尾精子 双头精子 视野中的畸形精子 四、发情鉴定技术 在细毛羊的繁殖过程中，发情鉴定是一个重要的技术环节。通过发情鉴定，可以尽快找出发情母羊，不至于失掉配种时机；可以确定最适宜的配种时间，以减少配种次数，提高受胎率；可以判断母羊的发情阶段以及发情是否正常，以便确定配种适期或发现疾病及时治疗，从而达到提高母羊利用率的目的。 准确地发情鉴定是做到适时输精、提高母羊受胎率以及养羊业经济效益的重要保证。根据母羊发情晚期排卵的规律，可以采取早、晚两次试情的方法配种，早晨选出的母羊下午配种，第二天早上再复配一次。晚上选出的母羊到第二天早上第一次配种，下午进行复配，这样可以大大提高受胎率。 细毛羊的生殖规律和发情 初情期 是指性器官已经发育完全，性腺第一次发情释放配子的时期。细毛羊的性成熟期一般在5～8月龄。为防止羔羊间早配和乱配，影响母羔的生长发育，羔羊断乳后应立即将公、母羔分群饲