课件：二十基因治疗.pptVIP

5. 基因转移的病毒载体法 根据不同组织细胞和目的基因选用不同的病毒载体，主要应考虑细胞对病毒的敏感性等因素。 病毒载体有一些特点 不同的病毒载体有不同的扩增、包装、感染、整合/游离的表达方式，如表13-1。 特定组织细胞 可考虑的主要基因转移方法和途径 游离淋巴细胞(ex vivo) 逆转录病毒载体，基因枪，电穿孔 肺组织 腺病毒载体，气溶胶 骨骼肌肉组织 裸DNA直接注射，基因枪 脑组织 单纯疱疹病毒载体 动脉管壁组织 逆转录病毒转染内皮细胞(ex vivo) ? 通过脂质体或气囊导管回输 肝组织 逆转录病毒，直接注射(腹膜内注射，感染宫内动物)或部分肝切除后门静脉内(或肝实质内)注射，ASOR—PL—DNA复合物ASGP受体结合，基因枪 ? ? 乳腺组织 逆转录病毒载体（乳头管注射） 皮肤组织 基因枪，电穿孔 （1） 动物病毒载体基因组中具有能被真核细胞识别的有效启动子序列可以引发标记基因和外源基因的表达； （2） 病毒在感染细胞中能持续地复制，使其基因组拷贝数达到相当高的水平； （3） 有些病毒具有控制自己复制的顺式（cis)作用元件和反式 (trans)作用因子，经过改造后，这些元件、因子能够在细胞内长期高拷贝复制，并保持外源性基因的复制型质粒特性； （4） 有些病毒能高效稳定地整合到宿主细胞基因组中，因此外源基因导入生效的效率较高； （5） 病毒的外壳蛋白能够识别细胞受体，高效地将外源基因导入宿主细胞。 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 四、基因治疗的临床应用 （一）遗传性疾病的基因治疗（表13-2） （二）肿瘤的基因治疗 （三）抗病毒的基因治疗 返回 （二）肿瘤的基因治疗 1．目的基因的选择和治疗策略 2．基因治疗方法 3．细胞因子的基因治疗 4．提高机体抗肿瘤免疫力的基因治疗 1．目的基因的选择和治疗策略 肿瘤的基因治疗就是以正常的或野生型的基因去取代不正常基因或阻止异常基因的表达，以达到抑制或阻止、甚至逆转肿瘤细胞恶性表现之治疗方法，因此目的基因的选择是很重要的。常选用的目的基因有：①增强机体细胞免疫功能、促进杀肿瘤和抑制肿瘤细胞生长的免疫调节和抗肿瘤作用的细胞因子基因如IL-2、IFN和集落刺激因子（CSF）及MHC的HLA-B7，HLA-DR基因, ②抑癌基因如P53，WT-1和Rb三种基因，③原癌基因的反义DNA及RNA和S iRNA等。 2．基因治疗方法 （1）抑癌基因转移的基因治疗 （2）反义寡核苷酸的原癌基因失活疗法 （3）药物自杀基因在肿瘤基因治疗中的应用 （4）癌抗原基因转移的肿瘤基因治疗如打破 原先的肿瘤免疫的耐受，建立肿瘤特异免疫 （5）多重耐药性基因转移的肿瘤基因治疗 （1）抑癌基因转移的基因治疗 抑癌基因或肿瘤抑制基因（Tumor Suppressor gene）或血管形成抑制因子基因是肿瘤基因治疗中很重要的基因，这种基因导入肿瘤或其他细胞后其表达产物可抑制肿瘤及肿瘤细胞的恶性增生、血管形成等，甚至可以使恶性肿瘤细胞发生逆转而成为正常细胞，目前研究和应用较多的抑癌基因包括P53、WT-1、Rb、Ango和Endo等基因，这些基因若发生突变、缺失或缺陷，易失去抑制细胞恶性增生和血管形成的功能从而致癌，若导入上述基因的野生型进行基因修饰就可抑制癌细胞的恶性增生。 （2） 反义寡核苷酸的原癌基因失活疗法 为了抑制肿瘤细胞中原癌基因的过高表达，可根据已知原癌基因的核苷酸序列合成反义寡核苷酸，来抑制 原癌基因的表达（因反义寡核苷酸能与原癌基因核酸中的正链的特定顺序互补结合形成双链体）。反义寡核苷酸有以下几种： （1）反义RNA （2）具有核酶（ribogyme）活性的反义RNA （3）脱氧寡聚核苷酸（oligo deoxyribonucleotides, ODN） （4）肽核酸（peitide nucleic acids, PNAS） 原癌基因 原癌基因（Proto-oncogene）是在亿万年漫长生物进化过程中高度保守的基因，说明原癌基因在细胞内是具有重要功能的，能调控细胞生长、增殖和分化。正常情况下其表达受到严格的控制，一旦调节失控，其基因产物为生长因子、生长因子受体、胞内外传递信号等就会出现分泌过剩，过多的这些物质即成为致癌物质，常导致细胞恶性增生，细胞恶性转化与原癌基因的活化密切相关。原癌基因活化程度对肿瘤的发生和发展具有重要的作用，原癌基因活化包括基因点突变、融合基因形成或异常激活后引起表达量异常等。 反义RNA技术 反义RNA是一种与mRNA互补的RNA分子，它是双链DNA中无意义链转录的RNA，因此肿瘤癌基因活化表达的mRNA的起始翻译部位就会被相应的反义RNA互补结合形成RNA/RNA双链体，进而就阻止了核糖体与m