课件：肿瘤靶向治疗分子标靶应用进展.ppt

2007 ASCO/CAP Guidelines Score 0 No staining is observed or cell membrane staining is observed in less than10% of the tumor cells. Score 1+ A faint perceptible membrane staining can be detected in more than 10% of the tumor cells. The cells are only stained in part of their membrane. Score 2+ A weak to moderate complete membrane staining is observed in more than 10% of the tumor cells. Score 3+ A strong complete membrane staining is observed in more than 30% of the tumor cells. JCO, 25(1): 2007 2009版中国乳腺癌HER2指南 0：无着色，或10%浸润癌细胞呈现弱而不完整着色； 1+：10%的浸润癌细胞呈现弱或中度强度，且不完整的膜着色； 2+：10%浸润癌细胞呈现弱或中度强度，且完整的膜着色；或30%浸润细胞呈现强且完整膜着色； 3+：30%癌细胞胞膜强染色，连续，环绕整个胞膜。 0, 1+ Negative 2+ equivocal 3+ Positive(曲妥珠治疗指征) EGFR/HER1蛋白 位于7p的EGFR基因的蛋白产物，广泛分布于哺乳动物的上皮细胞中 西妥昔单抗直接作用于EGFR的细胞外配体结合区，阻断EGF和TGFα等配体与EGFR结合，从而抑制细胞内酪氨酸激酶的活性，导致肿瘤细胞生长抑制和凋亡 2004年FDA批准西妥昔单抗用于治疗EGFR阳性的转移性大肠癌 EGFR/HER1蛋白 阳性反应定位于细胞膜。 反应强度分为1+、2+、3+。 1%癌细胞的胞膜染色超过背景细胞即为阳性，无论染色是否完整环绕胞膜。 ER、PR蛋白 阳性反应定位于细胞核。 染色强度及百分比。 2010 ASCO/CAP guideline 1% Positive, =1% Negative 临床上， 10%确切的用药标准， 1-10% ，需综合考虑 2.实时荧光定量PCR (qRT-PCR) 检测肿瘤分子靶点的mRNA表达情况。 操作简单，灵敏度高，快速，高通量。 仪器昂贵，最好需要标准PCR室。 有替代测序应用于基因突变检测，如EGFR, K-ras检测。 2-ΔΔct 3. 荧光原位杂交技术(FISH) 是一种分子细胞遗传学技术，通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交。在荧光显微镜下，于细胞和(或)组织原位观察并分析细胞核内杂交于DNA靶序列的多种彩色探针信号，以获得细胞内多条染色体(或染色体片段)或多种基因状态的信息。 FISH检测基因扩增，准确性比其它检测技术高，可避免由于染色体的多体而呈现的假阳性，金标准。 缺点：技术操作复杂，试剂及设备昂贵。 样本预处理 探针、样本变性 探针＋样本杂交 杂交后洗涤 结果观察 原理及实验操作 HER2基因：FISH HER2试剂盒为双色荧光标记探针：HER-2基因，为橘红色荧光，该基因所在的17号染色体着丝点为绿色荧光作为内对照，用于判断HER-2基因的拷贝数增多是真正扩增，还是由于17号染色体的多体而导致HER2基因拷贝数相对增多。 O/G2.2， Postive O/G1.8， Negative O/G 1.8-2.2, Equivocal 赫赛汀只对FISH检测HER2基因阳性者有效 HER2基因(FISH) EGFR基因：FISH 转移性结直肠癌患者的EGFR基因状态：EGFR基因拷贝数增加(扩增)的患者对西妥昔单抗治疗有显著疗效，而EGFR基因拷贝数无增加的患者对该药无效。 O/G2.0 or O6 Postive O/G=2.0， Negative 基因扩增的有效率约40-50％ 4. 显色原位杂交技术(CISH) 用碱性磷酸酶标记的探针，在甲醛固定、石蜡包埋组织切片上进行杂交，再用鼠抗地高辛抗体和辣根过氧化物酶抗鼠抗体进行免疫组合，DAB显色，普通光镜观察有无基因扩增的异常信号的技术。 缺乏内对照，无多种颜色信号，不能完全取代