邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯雄性Wistar大鼠生殖内分泌干扰作用机理探讨-劳动卫生与环境卫生学专业论文.docxVIP

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研 究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明 的法律责任由本人承担。 论文作者签名：—— 日 期： 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存论文和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名： 导师签名：——日 期：—— 山东太学埙士学位论文邻苯二甲酸二(2．乙基己基)酯雄性 山东太学埙士学位论文 邻苯二甲酸二(2．乙基己基)酯雄性 Wistar大鼠生殖内分泌干扰作用机理探讨 研究生：于淑江 导 师：李杰 教授 中文摘要 邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)作为聚氯乙烯(PVC)等塑料制 品的增塑剂，被广泛应用于工业、家庭及医疗器械等多个方面。DEHP在塑 料中是以游离形式存在的，在重量上可达PVC总重的30％．50％，进入环境 后难于自然分解。作为内分泌干扰物， 其对人类生殖系统的潜在危害性越来 越引起人们的重视。目前的研究认为， DEHP主要是通过作用于睾丸间质细 胞(Leydig cell)而发挥其内分泌干扰作用的。睾丸间质细胞分布在曲细精 管间的结缔组织中，约占睾丸总重量的2％，但分泌的睾酮却占睾酮总量的 95％。本实验通过测定DEHP对睾酮合成过程中的三种限速酶(细胞色素P450 侧链裂解酶、3B．羟类固醇脱氢酶和类固醇急性调节蛋白)转录水平的影响， 以及对与供能有关的酶的影响，从分子生物学水平探讨其对雄性生殖功能产 生的内分泌干扰作用机理。 目的： 本实验选用雄性Wistar大鼠，应用RT-PCR、酶组织化学及放射免疫技 术测定DEHP对睾酮台成过程中的三种限速酶转录水平的影响，探讨DEHP 在大鼠睾酮(T)合成过程中的作用机理，从而确定其内分泌干扰作用。 方法： 将出生后2l天的雄性Wistar大鼠分为阴性对照组和1、10、100mg／kg／day 三个齐4量组，每组14只。将溶于玉米油的DEHP经口灌胃染毒大鼠，每组 中的7只分别于染毒后14天和28天断头取血，取其双侧翠丸，应用逆转录 -聚合酶链反应(RT-PCR)、酶组织化学方法及放射免疫学方法检测酶合成及 活性的改变以及血清黄体生成素(LH)及T含量的改变。 山东大学硕士学位论文结果： 山东大学硕士学位论文 结果： 我们应用放射免疫学方法测定了染毒Wistar大鼠的血清T和LH浓度： 染毒14天各剂量组血清T浓度都有所下降，与对照组比较都有显著统计学 差异，其中10mg／kg／day组下降最为明显：lmg／kg／day组和10mg／kg／day组 的血清LH浓度与对照组无明显差别，100mg／kg／day组的血清LH浓度有所 升高，且与对照组比较有明显统计学差异。染毒28天后，各剂量组血清T 浓度均有所下降，但1mg／kg／day组与对照组比较无统计学差异，两个较高 剂量组与对照组比较统计学差异显著：染毒28天后各剂量组的血清LH浓 度与对照组比较均无统计学差异。 我们应用RT-PCR技术测定了Wistar大鼠的睾酮合成过程中的三种限速 酶转录水平的变化，结果显示；染毒14天，各剂量组类固酵急性调节蛋白 (StAR)基因的mRNA表达水平相对于对照组都有不同程度的减弱，而各 剂量组3B．羟类围醇脱氢酶(3B．HSD)$n细胞色素P450侧链裂解酶(P450see) 基因的mRNA表达水平相对于对照组都有不同程度的增强；染毒28天，各 剂景组StAR基因的mRNA表达水平相对于对照组均有所降低，其中 100mg／kg·day组降低最为明显，38·HSD基因的mRNA表达水平仅有 100mg／kg·day组相对于对照组有所降低，P450sec基因的mRNA表达水平相 对于对照组有降低趋势。 同时，我们应用酶组织化学技术测定了大鼠睾丸中葡萄糖．6．磷酸脱氢酶 (G-6PD)的活性改变情况；染毒14天后，四唑盐法测定大鼠睾丸G．6PD，显 示阴性对照组G-6PD活性最强，三个剂量组的睾丸G．6PD活性均有不同程 度的减弱，尤其以10mg／kg／day组染色最浅；染毒28天后，显示lmg／kg／day 组着色程度与阴性对照组无明显差别，其它两个剂量组均有不同程度的着色 变浅，尤其以100mg／kg／day组的染色最浅。 结论： 邻苯二甲