六色流式细胞术检测儿童B系急性淋巴细胞白血病相关免疫表型的实验分析-儿科学专业论文.docxVIP

广州医学院硕士学位论文六色流式细胞术检测儿童 广州医学院硕士学位论文 六色流式细胞术检测儿童 B 系急性淋巴细胞白血病相关免疫表型的实验研究 PAGE PAGE 2 六色流式细胞术检测儿童 B 系急性淋巴细胞白血病 相关免疫表型的实验研究 硕士研究生：刘光明 导 师：孙 新 教授 广州市妇女儿童医疗中心，广州 510623 中文摘要 背景： B系急性淋巴白血病(B- linage acute lymphocytic leukemia，B-ALL)是表达早 期白细胞分化抗原的恶性克隆性疾病，其发病率居儿童恶性肿瘤之首。随着流式 细胞术(flow cytometry，FCM)的发展及系列相关单克隆抗体的应用，作为传统的 形态学和细胞化学检查的必要补充，免疫分型已成为研究急性淋巴细胞白血病的 基本手段之一。由于白血病细胞是肿瘤细胞，会出现与正常细胞表面抗原不同的 免疫表型特征，既白血病相关免疫表型（Leukemia associated immunophenotype， LAIP）。LAIP一方面可以成为白血病的诊断依据，另一方面也为今后微小残留病 （minimal residual disease, MRD）的监测提供了依据。通过免疫分型不仅可以确 定B-ALL的细胞类型和分化阶段，而且依据初诊免疫分型时检查出的LAIP，也 成为了MRD检测的重要手段之一。 以往B系急性淋巴细胞白血病LAIP的检测主要是利用三色或四色流式细胞 术进行。近年来，随着新的荧光标记抗体技术的出现、多色荧光标记抗体的开发 和流式细胞仪设备的改进，使利用六色流式细胞术进行LAIP的检测成为可能。 本研究在以往我院三色流式细胞术免疫分型的基础上，探讨六色流式细胞技术在 B系急性淋巴细胞白血病相关免疫表型检测中的应用。 目的： 1、探讨广州地区105例B-ALL患儿白血病相关免疫表型体征，为利用六色流 式细胞术进行白血病相关免疫表型检测的抗体组合选择提供参考和依据。 2、评价六色流式细胞术在 B 系急性淋巴细胞白血病检测中抗体阳性率的稳 定性，探讨六色流式细胞术在 B 系急性淋巴细胞白血病相关免疫表型检测中的 优势，为运用六色流式细胞术进行 MRD 检测提供参考和依据。 方法： 1、回顾分析广州市妇女儿童医疗中心 2008.8-2010.2 收治的 105 例三色流式 细胞术诊断为 B-ALL 初诊患儿免疫分型结果，以 10 例非白血病患儿骨髓检测结 果为对照。 2、利用 CD20/CD34/CD10/CD22/CD45/CD19、CD7/CD5/CD13/CD33/CD45/ CD19 两组六色抗体组合对 25 例三色流式细胞术免疫分型诊断为 B-ALL 的患儿 骨髓标本进行六色流式细胞术检测，以 10 例非白血病患儿骨髓标本检测结果为 对照。 结果： 1、105 例患儿中 98 例可检测出 LAIP，LAIP 的表达特征为：CD19、CD10、 CD34、CD22、HLA-DR 过阳性表达率分别为 25%、47%、33%、11%、9%；CD45、 CD38、HLA-DR 弱阳性或缺失表达异常表达率分别为 66%、16%、5%；CD34、 CD20 共阳性跨阶段异常表达率为 25%；髓系相关抗原 CD13、CD33、CD15、 CD64 跨系列表达率分别为 23%、18%、16%、1%，T 系相关抗原 CD7 跨系列表 达率为 1%。 2、三色流式细胞术免疫分型中 CD19、CD22、CD10、CD20、CD5、CD13、 CD33、CD34、CD45 的阳性检出率分别为 96%、100%、76%、40%、4%、36%、 36%、84%、36%；六色流式细胞术中 CD19、CD22、CD10、CD20、CD5、CD13、 CD33、CD34、CD45 的阳性检出率分别为 100%、96%、80%、40%、4%、44%、 32%、84%、40%。三色流式细胞术免疫分型使用 23 种抗体共检测出 CD19strong、 CD10strong、CD34strong 、CD22strong、CD45-/dim、CD34+/CD38-、CD13+、CD15+、 CD33+、CD34+/CD20+ 10 种 LAIP。25 例中 23 例可检测出 LAIP，其中 1 个 LAIP 者 1 例，2 个 LAIP 者 4 例，3 个 LAIP 者 7 例，4 个 LAIP 者 5 例，5 个 LAIP 者 5 例，6 个 LAIP 者 1 例。六色流式细胞术使用