利用体内噬菌体展示技术寻找能够选择性定位在脑部血管内皮上的多肽-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

,t,lkl咖羽I医科人学硕I。埝义中文摘要 ,t,lkl咖羽I医科人学硕I。埝义 中文摘要 当前，血脑屏障是开发治疗脑部疾病药物的主要障碍．它使得超过95％的 斗lj天药物不能通过血脑屏障直接作用于中枢神经系统(CNS)(”。解决这一问 趟的方法之一，就是利用血脑屏障自身的转运系统，来发展中枢神经系统 (CNS)药物的传输策略。 南分子量的多肽主要利用血脑屏障(BBB)的受体介导转运系统(RMT)通 过巳细血管内皮进入脑组织中㈤。锵验致力于通过噬菌体展示文库来寻找一 』÷能够定位于脑部血管内皮的特殊的多肽．我们希望这些多肽能够作为药物转 j，j载仆通过RMT系统来引导药物通过血脑屏障。 ，．西钝，本实验通过鼠尾静脉注射将M13噬菌体展示文库Ph．D．一c7c”和 f Ph．D．一12 Peptide Libraries注入Balb／c小鼠体内，在一定时间范围内，噬 漪体通过血循环分布于体内各种器官的血管内皮上． 然后，将从脑组织中得到的噬菌体体外扩增，重新注入于Balb／c小鼠体内。 如此三个循环，使得定位于脑组织血管内皮的特异多肽所在的噬茵体颗粒得以 甯架。通过对多个噬菌体单克隆的测序，我们得到了六个特异的多肽序列。 接下来，将含有这些多肽的噬菌体颗粒分别扩增并分别注入若干小鼠体 内，以不舍插入序列的M13噬菌体作为对照组。比较含这六个多肽的噬菌体在 ff，腑，肺三种器官中的分布．通过与对照纽相比，我们发现了3个多肽，在 脑组织中有明显分布，它们分别是：CSKTAEHTC，QLADTTHHRPWP SV＼『ASLPVGMNSW。 术实验通过以克隆载体M13mpl8转化大肠杆菌ER2738，得到的无展示 序列的M13噬菌体作为免疫抗原，免疫纯种新西兰大白兔，得到抗M13噬茵 休的多克隆抗血清。对筛选到的序列进行免疫组化鉴定． 免疫组化染色显示，与无展示序列的对照组相比，CSKTAEHTC， ()L^DTTHHRP＼／＼『P两个序列在脑部有明显的阳性分布．CSKFAEHTC在肾部 布『!Jj显染色，而QLADTTHHRPwP在肾部则仅有轻微染色． 通过以上的工作，我们获得了两个能够明显定位于脑部的多肽序列，并开 始DNA重组工作以对这两个序列的血脑屏障通透性质等进行鉴定，以期获得 ／。 能够通过血脑屏障的序列，并进一步了解与血脑屏障相关的标志性分子． )r。：／ 1畸咖和医科人学硕．1：论文关键词：』塑鳗障j岁至统蔓塑塑叁壁鳓i磐∑ 1畸咖和医科人学硕．1：论文 关键词：』塑鳗障j岁至统蔓塑塑叁壁鳓i磐∑ 4 fq吣和跌科人学坝I‘轮史Brain fq吣和跌科人学坝I‘轮史 Brain targeting in vivo using phage display peptide libraries Abstract lit；]in d rug development is limited by the blood—brain barrier(BBB)，which restricts the p；i．；t=；ageintothe brain of95％ofall drug candidatesintendedfortheCNS(”Oneapproach tu solving the BBB problem is to target endogenous BBB transport systems，and to develop 【：N：；drug delivery strategies that take advantage of these natural portals of entry into the hrain． I_arger molecular weight peptides undergo RMT(Receptor-mediated transport at the BBB) thrc．19h the capillary endothelium in a matter of minutes(“．My research work is aimed at ,．．；creoning phage display peptide librades in vivo for some specific peptides，which can serve “：j brain drug transport vectors to transport CNS drugs through the BBB by RMT． First．I injected Ph．D．-c7cI”嗣J Ph．D．一12“peptide libraries intravenously into Balb／c mice a[id subsequently rescue