葡萄酒在酿造过程中戊唑醇的演变资料文档.pptVIP

戊唑醇在葡萄酒酿造过程中的演变; 1、文章摘要;试验的两个目的：;2.1 葡萄酒酿造试验 葡萄酒酿造试验A和B，各做两个重复，用2007年九月收货的葡萄进行试验。 A组去梗破碎后不添加农药进行葡萄酒酿造试验。 B组去梗破碎后添加农药进行酿造试验，添加戊唑醇的标准品达到3.3 mg/kg（这个水平是欧洲MRL, 2.0 mg/kg的1.6倍多）。 A组和B组的酿造方法相同。;2.1.1、葡萄就酿造过程;;2.1.2. 取样;2.2.化学药品;2.2.2. 模拟葡萄汁试验用到的药品 材料和培养基（蛋白胨，酵母提取物，琼脂和MRS培养基）来自Cultimed。葡萄糖，96%的乙醇，甘油，苹果酸，NaCl，CaCl2，H2SO4 95–98%，NaOH，3-5二硝基水杨酸，酒石酸钾钠。;2.3. 材料和仪器 2.4 提取步骤 破碎的葡萄(5 g),未发酵的葡萄汁和葡萄酒(各5 mL)的样本在50ml的聚丙烯做的螺旋帽的离心管中进行称量。25ml的二氯甲烷和丙酮(75:25, v/v)加入容器进行超声波浴10分钟来完全混合均匀。NaCl（3g）和无水硫酸钠（12g）加入后混匀5分钟。经过10分钟，4000转的离心分离后，把15ml有机物层转入40ml的瓶中在氮气流中干燥，残留物重新溶于2ml的乙腈液中。 净化 为了将杂质去除干净，进行固相萃取，使用Supelclean Envi Carb-II/PSA SPE固相萃取小柱，用乙腈：甲苯（3;1）5ml活化，将2ml的乙腈提取物上样，被吸附的农药残留用乙腈和甲苯（3;1）20ml进行洗脱到40ml的玻璃瓶中。洗脱液用氮气吹干，最后加入2ml丙酮定容，丙酮中含有3种保护剂(3-ethoxy-1,2-propanediol at 10 g/L; and D-sorbitol and L-gulonic acid c-lactone at 1 g/L; respectively).三种保护剂混合的使用可以弥补基质效应。戊唑醇的D6 (0.1 mg/L)标准液作为内标液也加入，丙酮提取物混匀。最后丙酮提取物放于350μL的玻璃注射器加入2ml的小瓶，用于色谱分析。 ;2.5. 戊唑醇的分析检测;2.6. 模拟试验中微生物的培养和发酵;具有主要葡萄酒特性的简单培养基用200 g/L葡萄糖、7 g/L蛋白胨、3.5 g/L酵母提取物，通过过滤0.22μm的膜滤器来杀菌。A ‘、C’的培养基中戊唑醇的含量是2 mg/L。B实验含有等来量的乙醇。对于三个不同条件下的试验，将每种配好的溶液平均分成49ml体积的各12份，对于A、B试验添加1ml的酵母菌液，对于C组试验添加1ml的灭菌水。所用的盛有样液的烧杯在20 ℃ and 75 rpm的震荡器上培养十三天。每组试验中的样本两两一组，分别于0, 3, 4, 6, 9 和 13 天取出进行单位体积的生物量、还原糖、发酵代谢物（乙醇、甘油）和戊唑醇的测定。;2.6.3. 苹果酸-乳酸发酵试验 三组试验进行：A酒球菌在戊唑醇存在的条件下进行培养。 B酒球菌在没有戊唑醇存在的条件下进行培养。 C在添加戊唑醇条件下未加酒球菌条件下进行。 和酒精发酵不同的是戊唑醇的浓度从2mg/L降到0.4mg/L,培养基也改变（1 g/L的葡萄糖、7 g/L蛋白胨、3.5g/l的酵母提取物、5g/l苹果酸和80ml/l的乙醇）。其他的和上述酵母菌的相同。 ;3、结果和讨论;;3.2.在葡萄酒加工过程中农药的减少;;根据A组和B组葡萄酒酿造过程中葡萄汁密度大小的比较，基本相同，时间周期在10–15天。为此可以的出这样的结论：酵母的发酵作用未收到农药戊唑醇的显著影响。 浸泡酒精发酵阶段是戊唑醇存在于酒还是酒渣的关键阶段，从开始的未发酵的葡萄汁到浸泡酒精发酵阶段的最后，戊唑醇分布于液相部分的葡萄汁和固相部分的葡萄渣，戊唑醇没有完全溶解于液相部分这是由于它的水溶性（0.032 g/L),从表2可以看出在酒中的农药残留只有12%，而葡萄酒渣中的农药残留占到88%，表明戊唑醇对悬浮于液相中的固体颗粒有很强的亲和性。 ;对于苹果酸乳酸发酵过程中，戊唑醇对酒球菌具有抗分解的性质，和酒精发酵结束时戊唑醇（0.6 mg/L)的浓度相当。 对于澄清过程，使用卵清蛋白，它可以除去大量的多酚物质，从使就具有较好的口感。经过这个过程，农残除去大约25%。 对于物戊唑醇的降解产物，由于没有降解产物检出，所以降解过程没有写到，文章写到为了进一步确定戊唑醇是否产生降解产物，需要做模拟试验（in vitro assays）来确定戊唑醇是降解了还是吸附到了固体介质上。;从上面得出的结果可以说明在葡萄酒的加工过程中，戊唑醇表现出连