手工丽春红S法检测尿总蛋白的分析性能验证及与干化学法的比较.docVIP

手工丽春红S法检测尿总蛋白的分析性能验证及与干化学法 的比较 马美红 陈春妍（惠东县人民医院检验科 广东惠东 516300） 目的 建立手工丽春红S法检测尿蛋白的性能验证方案和实验方法。方 法 参考美国临床和实验室标准化协会（CLSI）系列文件和相关文献[3-5],结合 工作实际，设计验证方案。对手工丽春红S法检测尿蛋白的精密度、准确度、分 析灵敏度、分析测量范围、临床可报告范围等性能进行验证和评价，并将实验结 果与美国强生Vitros 350干式生化分析仪所检测尿蛋口的结果进行比较。结果 尿蛋白含量在0.2g/L、4.0g/L时，手工丽春红S法测得口间不精密度分别为6.4% 和1.05%； 10个标准浓度检测结果与靶值的相对偏差均小于6.4%；检测低限为 0?2g/L；生物检测线在0.2?4.0g/L,功能灵敏度为0.5g/L,分析测量范围为0.2? 4.0g/Lo厂商提供的美国强生Vitros 350干式生化分析仪口间不精密度CVlt;2.4%； 检测低限为0.012g/L；分析测量范围0.017?0.024g/Lo结论 建立了临床手工丽 春红S法检测尿蛋口的分析性能验证方案和实验方法。本研究对规范医学实验室 建设和实验室认可，提高实验室手工法检测质量有重要意义。 关键词 性能验证 尿总蛋白 丽春红比色法 干化学法 R446 A 2095-1752 （2012） 23-0035-03 国际标准化组织（ISO）于2003年颁布了《医学实验室质量和能力的专 用要求》（ISO 15189） [1]作为医学实验室认可的标准，该标准要求申请认可的 实验室应对设备、检测系统或方法的主要分析性能进行验证，证实其能够达到所 要求的性能标准。我国2006年颁布的《医疗机构临床实验室管理办法》要求， 对未开展室间质评的检验项口，临床实验室必须对检测系统的分析性能进行评价, 才可将分析系统用于常规工作。国内近几年对各种全自动分析检测仪器的性能验 证的报道不在少数，但对临床手工法的检测性能验证却很少。如何合理选择、系 统设计定量检测项目方法学性能验证方案和实验方法的报道，更是少之又少。故 在此我们参考美国临床实验室标准协会(CLSI)系列文件和相关文献，结合具体实 际，探讨临床手工丽春红S法测定尿蛋片的方法学性能验证方案和实验方法，并 将结果与国际公认的质量指标进行比较。 一、 材料与方法 仪器和试剂 722S型分光光度计(上海科技仪器公司)及丽春红S染料、蛋白沉淀 剂三氯乙酸以及0.2mol/L氢氧化钠溶液，具体方法参考全国临床操作规程(第 三版)。 二、 验证方法和实验方法 1 ?精密度验证实验严格按照分光光度计标准操作规程对仪器进行维护 保养、校准和质量控制，选择低值(0.2L)和高值(4.0g/L) 2个浓度的标准品， 按标本检验程序进行吸光度测定。每天1次，连续20次，计算x-plusmn;s和变 异系数CV。 准确度验证实验(1)用浓度2.0g/L的校准品校准检测系统测定其吸 光度，再对其它浓度的校准品进行检测，换算成浓度后将其检测结果与各自的标 示值(靶值)进行比对，并计算检测值与靶值的相对偏倚(％),与可接受限进 行比对。 3?分析灵敏度验证实验分析灵敏度或检测限系指检测系统可检测的最 低分析物浓度。包括检测低限(lower limit of detection, LLD)生物检测限(biologic limit of detection, BLD )、和功能灵敏度(functional sensitivity, FS)。按 [5?6] 介绍的方法进行验证。(1)样品制备对原70g/L的丽春红标准品分别稀释成 l/5g/L. l/4g/L. l/3g/L. l/2g/L、1.0g/L 2?0g/L、2?5g/L、3?0g/L、3.5g/L、4.0g/L 的浓度，作为分析灵敏度的实验样品；(2)样品测定空白样品批内重复测定 10次，其他系列样品天间重复测定10次，记录每次检测的发光强度值(RLUs) 和浓度值(g/m)； (3) LLD的确定LLD为样品单次检测，可以达到的非空白检 测响应量对应的分析物的量。按99.7%的可信限,最低浓度样品RLUsx-plusmn;3s 所对应的尿蛋白含量即为LLD； （4） BLD的确定某样品单次检测可能具右的最 小响应量刚大于空白检测低限响应量，该样品内含有的分析物浓度为BLD。以LLD 的发光强度值为界,在系列低浓度结果中，某浓度下的RLUsx-plusmn;3s的RLUs, 刚好大于LLD的吸光度值，此样品光强度均值对应的尿蛋白含量为BLD； （5） FS 的确定以天间重复CV为20%吋对应检测限样品具有的平均浓度为检测系统可 定量报告分析物的FSo系列浓度样品