山奈酚对急性肝衰竭模型的作用及对内质网应激诱导肝细胞凋亡的研究-中西医结合临床专业论文.docxVIP

山西医科大学硕士学位论文 山西医科大学硕士学位论文 山奈酚对急性肝衰竭模型的作用及对内质网应激诱 导肝细胞凋亡的研究 摘 要 目的： 急性肝衰竭(acute liver failure，ALF)是由病毒、药物、毒物及酒精等原因引起的 大量肝细胞坏死及(或)严重的肝功能障碍，短期内进展至肝性脑病的一种综合征，病 死率极高。内质网应激诱导得细胞凋亡在急性肝衰竭中有重要作用。中医药在治疗急 慢性肝衰竭中有一定的疗效。本文通过研究不同浓度的中药提取物山奈酚对急性肝衰 竭小鼠模型的作用，观察其病理变化及肝功能水平；以及山奈酚对内质网应激诱导的 人肝细胞系 7702 细胞凋亡的影响。从内质网应激方面探讨山奈酚对急性肝衰竭细胞 凋亡的作用及机制。 方法： 选用雄性 C57BL/6 小鼠，实验分为 5 组，分别为正常对照组，急性肝衰竭模型组， 山奈酚低、中、高剂量干预组(分别为 5mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg)，每组 8 只小鼠。 经腹腔注射 D-氨基半乳糖联合脂多糖(D-GalN/LPS)建立急性肝衰竭模型。通过 HE 染 色观察肝脏组织病理变化；检测血清转氨酶 ALT、AST 水平反应小鼠肝功能。通过内 质网应激诱导剂衣霉素(TM)诱导人正常肝细胞系 7702 细胞发生凋亡，建立肝细胞损 伤模型，以不同浓度的山奈酚干预 7702 细胞(分别为 0.01 μmol/L、0.1 μmol/L、1 μmol/L)。分别用倒置显微镜观察 7702 细胞形态学变化；MTT 法检测 7702 细胞存活 率；流式细胞术检测 7702 细胞凋亡率；检测 7702 细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)含量； 同时采用免疫印迹法(Westen bloting)检测内质网应激相关凋亡相关蛋白 CHOP 的表达 情况。 结果： 实验结果显示：与模型组相比，山奈酚干预组显著减少了小鼠血清转氨酶 ALT、 AST 水平，并不同程度改善了小鼠肝脏组织的病理损伤，其改善急性肝衰竭小鼠模 型肝功能 的 作 用 随 浓 度 升 高 减 弱 。 ( 血清 ALT 水平： D-GalN/LPS 模 型组 I 1858.9±515.2IU/L ， 不 同 浓 度 山 奈 酚 分 别 为 186.5±63.1IU/L 、 254.9±82.8 IU/L 、 1413.1±327.1 IU/L，低、中剂量组与模型组比较，P0.01。血清 AST 水平：D-GalN/LPS 模型组 1961.4±474.8 IU/L，不同浓度山奈酚分别为 326.5±91.2 IU/L、331.9±65.4IU/L、 1928.8±256.6 IU/L，低、中剂量组与模型组比较，P0.01。)与衣霉素诱导的肝细胞凋 亡组相比，低浓度山奈酚组(0.01 μmol/L、0.1 μmol/L、1 μmol/L)显著抑制内质网应激 诱导得肝细胞凋亡，但随着浓度升高其保护作用减弱，包括改善细胞形态，增加肝细 胞 的 存 活 率 ( 衣 霉 素 模 型 组 80.14%±8.00% ， 不 同 浓 度 山 奈 酚 干 预 组 分 别 为 96.16%±10.00%，91.43%±9.10%，87.84%±6.90%，与模型组比较，P0.01)，减少了 7702 细胞释放 LDH(衣霉素模型组 398.5 U±30.8 U，不同浓度山奈酚干预组分别为 89.9 U±21.4 U，95.1 U±8.9 U，120.5U±24.2 U，与模型组比较，P0.01)，减少 7702 细胞的凋亡率 ( 衣 霉 素 模 型 组 4.58%±0.90% ， 不 同 浓 度 山 奈 酚 干 预 组 分 别 为 1.18%±0.48%，1.97%±0.32%，2.63%±0.16%，与模型组比较，P0.01)，并显著下调 内质网应激特异性凋亡蛋白 CHOP 的表达。 结论： 急性肝衰竭时引起大量肝细胞凋亡坏死，内质网应激是引起细胞凋亡的重要途径。 山奈酚干预急性肝衰竭小鼠模型可以改善其肝功能及病理学变化，并对内质网应激诱 导的人肝细胞系 7702 细胞凋亡有抑制作用，可能通过抑制 CHOP 的表达抑制内质网 应激来保护肝细胞，因此应用山奈酚可能为急性肝损伤提供新的干预措施。 关键词：山奈酚；急性肝衰竭；内质网应激；细胞凋亡 II III III The Role of Kaempferol in acute liver failure model and Endoplasmic Reticulum stress-induced Hepatocyte apoptosis Abstract Objective: Acute liver failure is a syndrome that expresses