浸润性乳腺癌中mtDNAHV2区突变及意义.docVIP

浸润性乳腺癌中mtDNAHV2区突变及意义 摘要：目的检测乳腺癌患者mtDNA D-loop环HV2区体细胞性突变 并探讨它在肿瘤发生中的作用。方法 采用聚合酶链反应-单链构像多态性 (PCR-SSCP)的方法对20例浸润性乳腺导管癌组织和癌旁正常组织的 mtDNA非编码区D-loop环HV2区进行分析，将出现异常条带所有标本进行 基因测序。结果 经PCR-SSCP检测，在20例乳腺癌mtDNA中共发现7例 出现异常条带；测序结果显示，7例?y序标本中，HV2区共检测到31个新 的突变位点，其中有3个属于微卫星不稳定性(microsatellite instability, MSI), 7 例移码突变,其余为点突变(point mutation), 7 个位点位于复制和转录的区域。结论浸润性乳腺导管癌mtDNA HV2区是 一个高度多态性和突变性的区域，它与乳腺癌的发生、发展有重要关系。 关键词：浸润性乳腺癌；mtDNA； 11V2区；聚合酶链反应-单链构像多 态性 Abstract： Objective To detect the effect of mutations of HV2 region of D-loop in mtDNA of the breast cancer?Methods It analysed the HV2 region of D-loop in mtDNA in the 20 cases invasive ductual breast carcinoma and 20 cases paracarcinoma tissues by PCR and PCR-single stranded conformation polymorism? Results The 7 cases exceptional bands wore found from 20 breast carcinoma in all of the samples by PCR-SSCP； and the sequencing resuIts indicated that 31 new HV2 mutations were found in 7 sequencing spocimcns, the 3 of them were mitochondrial microsatellite instability (MSI)； the 7 of them were frameshift mutations； others were point mutation； and the 7 of them located in the region of mtDNA replication and transcription.Conclusion The mtDNA HV2 region is a highly polymorphic and mutatblc region, that could be some rclations in the breast carcinoma development. Key words: Invasive ductual breast carcinoma； mtDNA； HV2； PCR-single stranded conformation polymorism 线粒体DNA (mitochondrial DNA, mtDNA)存在于细胞质的线粒体屮， 是细胞内唯一的核外遗传物质，由16569bp组成的双链闭合环状分子，含 有自我复制、转录和翻译的遗传体系。妣D7A含有37个编码基因，包括编 码氧化磷酸化系统13个蛋白质的亚单位、2个rRNA及22个tRNA的结构 基因。由于不受组蛋白保护，修复功能不完善，很容易成为致癌物质攻击 的标靶。因此mtDNA的突变与细胞癌变之间的关系已经越来越受到重视， 成为研究的热点。本文利用PCR-SSCP和基因测序法对mtDNA D-loop环HV2 区的基因突变情况进行了研究，并探讨了突变在乳腺癌进程中的作用。 1资料与方法 1. 1 一般资料 取自2004年5月?2005年7月延边大学附属医院肿瘤 外科手术的患者，20例乳腺癌组织及相对应的癌旁正常组织，手术后切除 部分组织立即投入液氮中，后放入-80°C冰箱中保存备用。20例乳腺癌患 者年龄为36~73岁，平均(51. 15±9. 54)岁，所选标本均经病理确诊为 浸润性导管癌。 1?2方法 1.2. 1组织DNA提取 应用小量组织DNA提取纯化试剂盒进行组织DNA 的提取，并用1%琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋口定量分析仪进行DNA提取及纯 度检测。选用GeneAmp 2400型PCR扩增仪进行PCR扩增。引物序列为HV2： 5,