第八章--离子交换法.ppt

第六节 离子交换操作方法 一、?树脂的选择 * 目的物是弱酸性或弱碱性的小分子物质时，宜选用强酸强碱树脂（氨基酸的分离）。 蛋白质、酶和其它生物大分子的分离多采用弱碱或弱酸性树脂，减少生物大分子的变性，利于洗脱，提高选择性。 ? 二、树脂的处理和再生 1、? 外观特征 * 2、? 树脂的预处理 （1）??? 物理处理：去杂，过筛。 （2） 化学处理：用8～10倍的1mol/L 盐酸或氢氧化钠溶液交替浸泡。 氨基酸分离前树脂的处理 * 不同类型树脂的处理 * 树脂的再生 树脂再生：使用过的树脂重新获得使用性能的处理过程。 * 再生过程 三、基本操作方法 * 三、基本操作方法 * 洗脱液 酸、碱洗脱液：改变吸附物的电荷或改变树脂活性基团的解离状态，以消除静电结合力，迫使目的物被释放出来； 盐类洗脱液：通过高浓度的同种电荷的离子与目的物竞争树脂上的活性基团，使吸附物游离。 * 洗脱方式 * 改变溶液pH及离子强度： 思考题 1. 混合溶液中，待分离目的蛋白质T的pI为7.9，杂质蛋白A的pI为5.4，杂质蛋白质B的pI为4.9，实验室现有SP Sepharose? Fast Flow （一种强阳离子交换树脂）,请设计一套实验方案，使用离子交换技术纯化目的蛋白质T。 * 第七节 应用实例 * 氨基酸制备、分离 猪血粉水解制备6种氨基酸: * 无盐水制备 氢型阳离子交换树脂 羟型阴离子交换树脂 * 除去水里所有离子 Me：金属离子 混合床系将阳、阴两种树脂混合而成，脱盐效果好。 * 第八节 新型离子交换剂 一、大孔、均孔树脂 （一）大孔型离子交换树脂（macro porous ,MP） （二）均孔型离子交换树脂 ( IR ) 二、多糖基离子交换剂 （一）离子交换纤维素 （二）葡聚糖凝胶离子交换剂 （三）琼脂糖凝胶离子交换剂 * 常用的离子交换纤维素 羧甲基纤维素（CM-C）： 弱酸性阳离子交换纤维素，pK=3.6 二乙基氨基乙基纤维素（DEAE-C）： 强碱型阴离子交换纤维素，pK=9.1 * 葡聚糖凝胶离子交换剂 是将活性交换基团连接于葡聚糖凝胶上制成的各种交换剂 具有离子交换和分子筛的双重作用，对生物分子有很高的分辨率。 * 命名: 交换活性基团-Sephadex C (A)-编号 * 多糖基离子交换剂应用——尿激酶分离纯化 * 多糖基离子交换剂应用——尿激酶分离纯化 * * 大孔型离子交换树脂 第八章 离子交换法(ion-exchange) * 第一节 基本原理 离子交换法：利用溶液中带电粒子与离子交换剂之间结合力的差异进行物质分离的操作方法。 * 静电力 * * 树脂的选择 * 比如：蛋白质带正电荷还是负电荷？ 树脂的选择 * 第二节 离子交换树脂的结构和种类 载体：惰性的不溶性高分子固定骨架。 功能基团：与载体共价键连接的不能移动的活性基团 平衡离子：与功能基团以离子键连接的可移动的活性离子 * 离子交换树脂构成 一、离子交换树脂的分类 * 阳离子交换树脂分类 强酸型树脂（有好的解离能力）： 磺酸型树脂，功能基团为磺酸根(—SO3H) 甲基磺酸根(—CH2SO3H) 中酸性树脂 磷酸型树脂（—PO3H2 ） 弱酸性树脂（酸性环境中解离度受到抑制） 羧酸型树脂（—COOH） 酚型树脂（ ） * 阴离子交换树脂 强碱型阴离子交换树脂 季铵基 弱碱型阴离子交换树脂（在碱性环境中解离度受到抑制） 伯、仲、叔胺基 中强碱性阴离子交换树脂 兼有以上两类活性基团 * 离子交换树脂的性能 * * “strong and weak” refer to the extent that the ionization state of the functional groups varies with pH. The terms strong and weak do not refer to the strength with which the functional groups bind to proteins. Strong ion exchangers show no variation in ion exchange capacity with change in pH . Strong ion exchangers include Q (anionic), S and SP (cationic). These exchangers do not take up or lose protons with changing pH a