国人缓慢性心律失常患者中SCN5A基因新的单核苷酸多态性位点.pdfVIP

华中科技大学硕士学位论文 前 言 心脏钠离子通道（INa ）是电压门控钠通道家族中的一员,在心脏动作电位除极 0 期和复极 2 期发挥主要作用。心脏钠离子通道蛋白由 α-亚基和 β-亚基组成。α-亚基 可形成有功能的离子通道,辅助性β-亚基可与其相互作用改变通道的生理特性。α-亚基 由位于3p21 的SCN5A 基因编码。它全长约 80kb，包括28 个外显子，共编码2016 个氨基酸。α-亚基在细胞膜上形成4 个类似的同源结构域(Domain,D Ⅰ～DⅣ) 。每个 区域由6 个跨膜片段( S1～S6)组成,每个同源结构单位均包含6 个跨膜区和1 个成孔 ［ ］ 1,2 区,同源结构间的连接部分及通道的N 端和C 端均位于细胞浆内 。随着心脏离子 通道功能研究的不断深入,证明心脏离子通道在心律失常的形成上处于主要的或根本 的作用;通过对心律失常家系的研究, 已有多个离子通道基因被证明与心律失常的形成 相关,其中 SCN5A 基因突变可引起长 QT 间期综合征 3 型(long QT syndrome 3 ,LQT3) 、Brugada 综合征(Brugada Syndrome, BS)、进行性和非进行性房室传导阻 滞（heart block,nonprogressive or progressive ）、婴儿猝死综合征（sudden infant death syndrome ）及特发性心室颤动（ventricular fibrillation ）、扩张型心肌病 ［ ］ 3-9 （cardiomyopathy,dilate ）、窦房结功能不全(sick sinus syndrome)等 。 + 过去对于Na 通道在心脏起搏活动的意义存在许多争议，人们认为窦房结细胞的 INa 通道蛋白很少或没有，但是目前越来越多的研究发现，窦房结特别是窦房结周细 ［ ］ 胞的INa 通道蛋白密度为 100pA/pF 10 ，INa 对中央窦房结细胞动作电位的作用较小， ［ ］ 但它存在于周边窦房结细胞的动作电位中，并起辅助作用 11 。而且使用TTX 可以减 ［ ］ 慢心率 12-14 ，这更为INa 为窦房结自主节律形成的离子流之一提供证据。近期又发现， SCN5A + / - 鼠出现了包括房室传导受损、心肌内传导延迟、心动过缓的缺陷,这些都 ［ ］ 15 表明SCN5A 在控制心脏起搏和传导中起重要作用 。 本实验旨在发现国人 SCN5A 基因新的突变位点, 并了解缓慢性心律失常与 SCN5A 基因单核苷酸多态性(SNP)之间的相关性。 4 华中科技大学硕士学位论文 材料和方法 （一）主要仪器和试剂及配制： 1.主要仪器 1） DNA/RNA 定量仪（Eppendorf ） 2 ） PCR 仪 （MWG AG Biotech ） 3 ） 凝胶成像分析系统 （Syngene） 4 ） DYY-Ⅲ型三相电泳仪 5