DNA-三苯甲烷类染料体系的RLS的研究与应用.pdfVIP

Keywords：deoxyribonucleicacid(DNA)，Resonance Light- Scattering(RLS)，Brilliant Green(BG)，VictoryBlue—B(VBB)， Violet Methyl 6B(MV-6B)，New Dyes System 苏界殊：DNA．三苯甲烷类染料体系的RLS的研究与应用 引 言 核酸也称多聚核苷酸，是构成生命的重要化学物质。可分为两 acid，简称DNA) 种不同类型，即脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic 和核糖核酸(ribonucleic acid，简称RNA)。这两类核酸在所有动物 和植物中都存在，DNA是一种遗传物质，主要存在于细胞核染色 体中，RNA在蛋白质生物合成中起着突出作用，主要分布在细胞 质中。 并结合DNA钠盐晶体的x射线衍射分析，提出了DNA是由两条 多核苷酸链构成的双螺旋分子并制造了双螺旋结构模型f见图 0-1)。DNA双螺旋结构模型具有以下特征：两条多核苷酸链以相同 的旋转方向共绕同一中心轴形成右手双螺旋，螺旋直径为20A；两 条多核苷酸链是呈反向平行的，多核苷酸链是许多核苷酸通过磷酸 二酯键连接成的聚合物，核苷酸是由核苷和磷酸脱水而成，而核苷 又是由戊糖的苷羟基和碱基脱水缩合 而成；二条多核苷酸链的糖．磷酸骨架 处于双螺旋的外侧，碱基结合的平面 处于链的内部。沿螺旋方向看，双螺 磷敞基骨架 旋表面有两个沟槽，一个宽槽和一个 窄槽，这两个沟槽使碱基外露，为分 子探针或其它分子与碱基作用提供了 碱些射 空间。 这一模型揭示了DNA分子作为 一种遗传物质储存和传递信息的化学 机制，建立了生物遗传基因的分子机 理。核酸结构与功能的研究是分子生 物学的研究生命的主要内容，核酸序 囤D～1 眺双螺旋结构 列分析和人的基因组测序是进行生命 研究的重要步骤，促进了核酸的各种分子探针及染色剂的研制和在 苏界殊：DNA．三苯甲烷类染料体系的RLS的研究与应用 各种DNA分析技术中的开发应用，对阐明遗传因子的机能、疾病 的基因诊断和基因药物治疗以及遗传基因工程在农业、牧业、医学 和环境保护等方面的实施具有重要作用。 一、定量测定核酸的重要意义 1、DNA的定量测定是研究DNA的基础，它的测定对于研究DNA的生 物化学反应、发展DNA医药制品以及对疾病的诊断和防治均有重要 的意义，同时也可为生物化学和临床分析中微量生物大分子的测定 开辟新的途径。 2、生物大分子与小分子的相互作用在生理上，病理和毒理过程中 具有极其重要的意义，必要元素及有毒元素在体内的运输、吸收、 药物受体的结合及金属酶的活性都与这些作用有关。因此研究以 DNA为代表的大分子与小分子的相互作用对于指导药物设计与合 成，对于了解生物大分子的结构与功能，对于探索超分子体系的化 学本质等都有重要的意义。 二、目前定量分析核酸的进展 到目前为止，已有多种测定核酸的方法，如色谱法、探针技术 法、显微光度法、免疫分析法、分光光度法以及荧光光度法等【l七”， 其中以分光光度法和荧光光度法使用较多。近年来共振光散射法作 为一种新兴的分析方法，因其灵敏度高，选择性好，且方法简便， 用于核酸的测定显示出较好的优越性。 1．光度分析法 DNA由磷酸根、碱基(包括腺嘌呤A、鸟嘌呤G、胞嘧啶、胸腺 嘧啶T)和脱氧戊糖三部分所组成，因而可以基于其组成成分对它 进行测定。 1．1溺q糖法 在水溶液中，核酸的嘌呤核苷键易于水解断裂而生成含有戊糖 醛基的水解产物，这种产物在酸性介质下可转变成糖醛衍生物，生 成的衍生物可与一些试剂呈现颜色反应，根据这一特性可建立核酸 的定量测定