课件：微生物计生.ppt

实验方法与技巧 5．沙眼衣原体：检查方法有酶免疫（EIA）、直接荧光素标记抗体法（DFA）、PCR等，EIA特异性强，阳性预期值基本可靠。DFA是应用最多的检测方法之一，荧光素标记抗体和衣原体结合后发出苹果绿色荧光，此法操作简单、特异性强，需要有经验的实验室技术人员完成。 沙眼衣原体胶体金法 沙眼衣原体胶体金法 检验原理：?用抗衣原体脂多糖单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体分别固定于固相硝酸纤维素膜，并和胶体金标记的另一抗衣原体脂多糖单克隆抗体及其他试剂，应用胶体金免疫层析技术，采用双抗体夹心的形式建立的衣原体检测方法。 Colloidal gold immunochromatography strip 0755主要组成成份 沙眼衣原体抗原快速检测试剂卡； ?溶液A 1瓶（含0.2M NaOH溶液，7.5ml）。?溶液B 1瓶（含0.2M HCl溶液，7.5ml）。?样品处理管。 检验方法 A.处理样品①加入6滴溶液A于反应管中。②?将采样拭子放入含有溶液A的样品处理管中，不断旋转并在管壁挤压拭子，使液体不断被挤出，重复多次，处理2分钟。③?加入6滴溶液B，旋转并挤压拭子，尽量使液体流出，然后按感染物品的处理方法将拭子丢弃。④?处理后的样品如在60分钟内使用，并不影响试剂盒的检测结果。注意：用A、B液处理样本拭子滴加的溶液量应相等。 B.检测步骤 将已处理的样品滴加2～3滴至检测试剂盒的加样孔中，10分钟时可判读结果。 为了确保阴性结果，请勿在15分钟后判断结果。 为保证检测结果的正确性，须做阳性、阴性质控对照品检测。 检验结果的解释 阴性结果：仅质控线（C）有一条红线。 阳性结果： C 和T 都有一条红线。 无效结果：质控线不出现红线。 注意：检测线很强时，质控线可能相对减弱，属正常现象。 实验方法与技巧 6．生殖道支原体：取子宫颈管内的分泌物（拭子或刮片）。把标本直接分离接种于支原体鉴别培养基和增菌培养于一组含有指示剂（酚红）和尿素或精氨酸或葡萄糖的培养基中观察其分解反应，是诊断支原体感染的唯一可靠方法。 生殖道支原体 R1 =支原体标本处理液 营养低è 仅维持存活 含抗生素 è抑制其他菌生长 保存: 2 - 8°C 标本采集后, 20 - 25°C 4~5 h内必须转种 2 - 8°C 48 h内必须转种 生殖道支原体 R2 = 尿素- 精氨酸冻干肉汤 非平衡营养适合支原体生长 针对性强的抗生素 马血清:富含胆固醇 添加营养素 底物:尿素,精氨酸 pH指示剂:酚红 用3 ml R1溶解 è 尿素- 精氨酸肉汤 用涡旋振荡器 生殖道支原体 方法 R1 R2 运送 溶解 R1+R2 接种试剂条(55 μl) + 2滴矿物油 O Uu Mh Uu Mh 104 104 4 2 1 1 4 1 0.12 1 2 Mycoplasma IST2 37°C培养24~48 h 生殖道支原体 鉴定 生长对照: 首先判断 如果(+) è 观察其他孔 如果(-) è不再判断 1孔鉴定解脲脲原体: 高浓度林可霉素抑制Mh生长 1孔鉴定人型支原体: 高浓度红霉素抑制Uu生长 红色 è 阳性 (+) 黄色 è 阴性 (-) 生殖道支原体 计数 原理 : 含标准抑制剂浓度104 CCU (颜色变化单位) 结果: 如果标本中菌数等于或大于104 颜色发生变化 红色 (+) è 计数 104 CCU 黄色 (-) è 计数 104 CCU Uu : 结果判断必须在20和24 h Mh : 结果判断在 24和48 h后 生殖道支原体 药敏试验 治疗常用的9种抗生素: 环素类: 四环素和多西环素 大环内酯类: 交沙霉素, 红霉素, 阿奇霉素,克拉霉 喹诺酮类: 氧氟沙星, 环丙沙星 林可酰胺类: 原始霉素 检测 2个浓度: 结果以S, I, 或 R表示 生殖道支原体 结果判断 首先检查尿素- 精氨酸肉汤: 确认肉汤不混浊(污染) 观察颜色 试剂条: 即使颜色由黄色至橙黄色轻微变化也应判断为阳性 除计数孔:阳性结果必须是红色 特殊情况 : 肉汤 试剂条 - + 试剂条污染 /或操作不正确 + - 支原体量少 用A7琼脂确认 谢谢 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 * * * * * * * * 可编辑 可编辑 阴道分泌物检查 武汉大学中南医院检验科 周俊英 阴道分泌物检查 阴道分泌物（vaginal discharge） 阴道分泌物是女性生殖系统分泌的液体。 主要有： 分泌物的混合物，俗称“白带”(leucorrhea).