课件：细胞生物学翟中和三.ppt

细胞生物学 ６、斑马鱼 １）特点: 产卵多,繁殖迅速 胚胎通体透明, ２）应用： 是进行胚胎发育机理和基因组研究的好材料 细胞生物学 ７、小鼠 １）特点： 小型哺乳动物，进化上与人类接近， ２）应用： 遗传学，组织学，胚胎学，细胞生物学研究 细胞生物学 ８、拟南芥 拟南芥是一种十字花科植物，广泛用于植物遗传学、发育生物学和分子生物学的研究，已成为一种典型的模式植物，其原因主要基于这种植物具有以下特点： （1）形态个体小，高度只有3Ocm左右； （2）生长周期快，从播种到收获种子一般只需6周左右； （3）种子多，每株每代可产生数千粒种子； （4）形态特征简单； （5）基因组小，只有5对染色体。 细胞生物学 细胞生物学研究方法结束语 过上面的介绍我们看到，模式生物已经在现代生命科学基础 　　研究中具有举足轻重的地位。但是，模式生物在我国的研究才刚刚起步，与国际领先研究水平差距很大。作为亡羊补牢之举，我国启动了家蚕模式生物的研究计划，试图建立另具特色的新模式生物（家蚕是鳞翅目昆虫的代表物种，果蝇属双翅目昆虫）。 不论将来生命科学如何发展，果蝇、线虫、酵母、小鼠这些经典模式生物在科学史上的地位已永远不可撼动，与此相关的一串名字，将和他们闪光的思想一道，永载史册。???????? 除了一段段引人入胜的生命故事，模式生物还具有更深远的意义。它昭示于人的，乃是最不可思议的事实：这世界竟是可以理解的……??? THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 细胞生物学 三、特异蛋白抗原的定位与定性 (一)免疫荧光技术 将试剂抗原或试剂抗体用荧光素进行标记，试剂与标本中相应的抗体或抗原反应后，测定复合物中的荧光素，这种免疫技术，称为免疫荧光素技术。 常用的标记物有荧光素和酶。 免疫荧光法（immunofluorescent technique）：常用的萤光素有异硫氰酸荧光素、罗丹明等。 酶标免疫法（enzyme-labeled antibody method）：常用的酶有辣根过氧化物酶，酶与底物发生反应后形成不透明的沉积物，从而显示出抗原存在的部位。 细胞生物学 间接法原理示意图 细胞生物学 补体结合法原理示意图 细胞生物学 (二)免疫电镜技术 又称为免疫细胞化学技术是在免疫组织化学技术的基 础上发展起来的，它是利用抗原与抗体特异性结合的 原理，在超微结构水平上定位、定性及半定量抗原的 技术方法。该方法为精确定位各种抗原的存在部位、 研究细胞结构与功能的关系及其在病理情况下所发生 的变化提供了有效的手段。免疫电镜技术主要经历了 铁蛋白标记技术、酶标记技术以及胶体金标记技术三 个主要发展阶段。 细胞生物学 铁蛋白标记技术适用于细胞膜表面抗原的定位， 由于其分子量较大，不易穿透细胞膜，定位细胞 内抗原较为困难。铁蛋白对电镜包埋剂的非特异 性吸附很强，不适用于包埋后免疫标记，使其应 用受到一定限制。 细胞生物学 酶标记免疫电镜技术是将酶（主要是过氧化物酶）与 抗体相交联，抗原抗体反应后，加底物显示酶的活性 部位，酶反应产物经OsO4处理变为具有一定电子密 度的锇黑，可在电镜下观察。过氧化物酶的相对分子 量较小，与其交联的抗体较易穿透经处理的细胞膜， 可用于细胞内抗原的定位。但是酶反应产物比较弥 散，因此分辨率不如颗粒性标记物高。 细胞生物学 胶体金标记免疫电镜技术是目前应用最广的免疫电镜标记物，该技术是将胶体金作为抗体的标记物，用于细胞表面和细胞内多种抗原的精确定位。胶体金主要具有以下几个优点：（1）胶体金能稳定并迅速地吸附蛋白，而且蛋白的生物活性不发生明显改变，可制备抗体-胶体金、蛋白A-胶体金、卵白素-胶体金、植物凝集素-胶体金等用于免疫电镜；（2）在电镜下金颗粒电子密度高、圆形且界线清晰，易于辨认，定位比酶反应物更精确；（3）胶体金标记物易于制备，并可以根据需要制备大小不同（1～150nm）的胶体金，因此可进行免疫电镜的双重或多重标记；（4）金颗粒能发射强烈的二次电子，是扫描电镜的理想标记物；（5）胶体金经过银显影增强后，金颗粒外周吸附大量银颗粒而呈现黑色或黑褐色，因此也能用于光学显微镜观察。此外，胶体金还能用于冷冻蚀刻标本的免疫标记。 细胞生物学 四、细胞内特异核酸序列的定位与定性 具有互补核苷酸序列的两条单链核苷酸分子片段，在适当条件下，通过氢键结合，形成DNA-DNA，DNA-RNA或RNA-RNA杂交的双链分子。这种技术可用来测定单链分子核苷酸序列间是否具有互补关系。 （一）原位杂交（in situ hybridization） 用于检测染色体上的特殊DNA序列。最初是使用带放射性的DNA探针，后来又发明了免疫探针法。 细胞生物学 （二）Southern杂交 是体外分析特异DNA序列的方法，操作时先用限制性内切酶