六君子汤合左金丸治疗小鼠急性放射性十二指肠炎疗效和机制探究.docxVIP

六君子汤合左金丸治疗小鼠急性放射性十二指肠炎疗效和机制探究 ［摘要］目的：评估六君子汤合左金丸治疗小鼠急性 放射性十二指肠炎的疗效，与临床常规抑酸联合黏膜保护制 剂对比，探讨其产生疗效的机制。 方法：根据文献研究，参考放射性肠炎模型建模标准结 合十二指肠特征，首创小鼠放射性十二指肠损伤模型。将模 型小鼠随机分为对照组（n=26）、中药干预组（n=16）、西药 干预组（每只法莫替丁悬液0. 5 mL+铝镁加混悬液0. 3 mL灌 胃，每日1次，n=16）o标准给药后通过小鼠一般情况、体 重、健康评分变化、病理学、炎性因子表达等客观指标评价 疗效。 结果：选取12 Gy成功建立小鼠放射性十二指肠炎模型。 对照组小鼠出现体重下降，厌食、少饮、稀便，偶有黏液血 便，精神差，皮毛不光整、少动、弓背等表现。药物干预组 小鼠一般情况较单纯照射组好转。中、西药干预组脾、肠系 膜淋巴结组织IL-6, IL-IB, TNF-a的表达与对照组相较 有下降趋势，外周血中三者浓度变化亦有所体现，中药组在 降低炎性因子方面优势显著。镜下观察可见中、西药干预组 较单纯照射组黏膜有所修复，改良Chiu氏法评分中西药组 间差异有统计学意义（P 1.4造模及分组实验用SPF级 Balb/c小鼠适应性喂养3d,禁食12h,自制麻醉复合制剂 （速眠新-氯胺酮2 ： 1.5）腹腔注射麻醉后固定于特制模具, 按照0, 4.5, 6.0, 9, 12, 13.5, 15 Gy递增剂量分组，采 用体部伽马刀同源60Co射线摸索小鼠放射性肠炎建模剂量, 成功建立放射性十二指肠炎模型后，将模型小鼠随机分为对 照组（n=26）、中药干预组（「16）、西药干预组（n=16）。 连续灌胃给药7 d （照射及照射前4 d,照射后3 d）,中药 组给药方法：每只2 mL中药液灌胃（按照六君子汤合左金 丸中药配方配伍颗粒剂型，以50 mL灭菌注射用水37匸水 浴制成匀浆），每日1次；西药组给药方法：法莫替丁胶囊 20 mg加入50 mL灭菌注射用水，每只0.5 mL灌胃，每日1 次；铝镁加混悬液每只0.3 mL灌胃，每日1次，对照组采 用生理盐水每只0.8 mL灌胃。药物用量的换算参照《医药 实验动物模型制作与应用》中人与小鼠口服用药量换算方 法，本实验采用的给药方法相当于同等体重条件下成人给药 量的30倍。末次给药后12 h处死小鼠并采集标本。 1.5检测指标观察小鼠一般情况，评估体重及健康评分 变化［1, 13］。 病理学观察大体标本及镜下改变：取小鼠十二指肠组 织，大体标本观察有无水肿、充血、溃疡、出血、狭窄等改 变，福尔马林固定，生理盐水冲洗，包埋、切片、HE染色， 镜下观察，改良Chui氏评分法评分。 炎性因子检测：Real-time PCR测量脾及肠系膜淋巴结 组织匀浆IL-6, IL-1 3 , TNF-a炎性因子的表达，ELISA双 抗夹心法测量外周血IL-6, IL-IB, TNF-a炎性因子含量。 1.6统计学处理采用SPSS 13.0进行统计分析，计量资 料以土s表示，多组间比较采用单因素方差分析，2组间 比较采用t检验，必要时采用Mann-Whitney检验，计数资 料比较采用卡方检验。P值为双侧，检验水准a二0. 05o 2结果 2. 160CO-ARE模型的建立各组小鼠受照射后一般状态及 生存情况：4.5, 6.0, 9 Gy照射组未见稀便，照射后2 d出 现不同程度的精神差，食欲降低，饮水量下降，照射约5?7 d即可恢复正常，12, 13.5, 15 Gy照射组照射后2 d均有 程度不一的稀便，偶有小鼠出现血便，至照射后7 d仍不能 好转，其中13.5, 15 Gy照射组出现小鼠死亡，13.5 Gy组 死亡率约25%, 15 Gy照射组死亡率约40%。各组小鼠体重均 有下降（图1）, 4.5, 6.0 Gy组在照射后5 d出现体重回升, 余组持续下降，以12, 15 Gy组下降最为显著。各组健康评 分随照射后时间延长均有下降，以12, 13.5, 15 Gy照射组 最为明显，三者与9 Gy组之间的差异有统计学意义（P 图5放射性肠损伤诱导机体分泌IL-6 Fig. 5Radioactive intestinal injury causes the body secrete IL—6 2. 460CO-ARE小肠辐射损伤后病理学改变60Co-ARE模型 组较对照组出现肠黏膜变薄、萎缩，上皮细胞脱落，肠绒变 短，隐窝结构不清，或有炎性细胞浸润，细胞有丝分裂象减 少，固有层炎性细胞浸润，黏膜淋巴管扩张，黏膜下血管充 血扩张，肠腺存活率下降等现象。满足Guzman-Stein G等 制定的放射性肠炎模型标准。综上所述，4.5, 6, 9 Gy 照射损伤较轻，无法很