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咖啡酸在大鼠体内绝对生物利用度和其在 肠道吸收特性探究 ［摘要］目的：研究咖啡酸在大鼠体内的绝对生物利 用度及其在肠道的吸收特性。方法：大鼠分别采用静脉（2 mg ? kg-1）.灌胃（10mg?kgT）给药研究咖啡的绝对生物利 用度；建立大鼠原位肠血管灌流模型研究咖啡酸在肠道的吸 收率；采用Caco-2细胞模型研究咖啡酸的双向转运情况。 结果：咖啡酸静脉（2 mg ? kg-1 灌胃（10 mg ? kg-1）给 药后，在大鼠体内的药动学行为均符合二室模型，咖啡酸的 绝对生物利用度为14.7%；咖啡酸在肠血管灌流模型中的吸 收率为12. 4%；咖啡酸的PappAP—BL及PappBL—AP不随浓 度的变化而变化，且在实验浓度的范围内， PappBL—AP/PappAP-BL均大于2。结论：咖啡酸绝对生物 利用度低，肠道吸收率少，在Caco-2细胞单层模型中的转 运途径可能为主动转运。 ［关键词］咖啡酸；生物利用度；肠吸收率；通透性 咖啡酸（3, 4-二释基肉桂酸）是自然界中分布非常广 泛的多酚类化合物，具有抗氧化、抗菌、抗癌等作用［1-3］ o 有研究报道，每天摄食一定量的咖啡酸可以预防肝癌、皮肤 癌［4-5］ o咖啡酸是咖啡酸片主要成分，临床上用于止血。 据报道咖啡酸的代谢部位主要是小肠，经肠道细菌代谢［6］。 咖啡酸在大鼠血浆中代谢物主要是葡醛酸结合物、硫酸结合 物及少量的原型药物［7］。少有文献报道咖啡酸的绝对生物 利用度，因此，本文采用传统的体内法研究咖啡酸在大鼠体 内的绝对生物利用，建立大鼠原位肠血管灌流法研究咖啡酸 的肠吸收率及运用Caco-2细胞模型研究咖啡的通透性，旨 为咖啡的临床应用提供理论指导。 1材料 咖啡酸（110885-200102）、肉桂酸（ 110786-200503） 购自中国食品药品检定研究院；牛血清白蛋白购自齐云生物 技术有限公司；DMEM培养基、胎牛血清、非必需氨基酸购 自美国Hyclone公司；L-谷氨酰胺、胰蛋白酶，购自美国 Sigma公司。乙睛为色谱纯，其他试剂均为分析纯。 血管灌流Krebs-Ringerz s液的配制：称取NaCl 7. 8 g, KC1 0. 35 g, CaC12 0. 37 g, MgC12 0. 22 g, NaH2P04 0. 32 g,葡萄糖3.0 g, NaHC03 1.37 g,蒸馆水定容至1 L,临 用前加入5%牛血清白蛋白。HBSS溶液的配制：称取8 g NaCl, 0. 4 g KC1, 1 g 葡萄糖，60 mg KH2P04, 47. 5 mg Na2HP04, 调pH至7. 2,加蒸馆水定容至1 Lo 4000Q TRAP串联四极杆质谱仪（美国Applied Biosystem公司）；LC-20AD高效液相色谱仪（日本岛津公 司）；细胞培养箱（德国Hearous公司）；24孔Transwell 培养板（美国Costar公司）；Millicell-ERS跨膜电阻仪（美 国Millipore公司）；飞鸽髙速离心机（上海安亭科学仪器 厂）；HL-2D恒流泵（上海精科实业有限公司）。 SD大鼠，雄性，体质量200?250 g,购自广州中医药 大学实验动物中心，许可证号SCXK （粤）2008-0020o 2方法 2. 1分析方法 2. 1. 1色谱条件 色谱柱为Phenomenex C18柱（2. 0 mmX50 mm, 5 um）,柱温30 °C；流动相A为甲醇-水（5 : 95） 和10 mmol ? L-1醋酸铁，流动相B为甲醇-水（95 : 5）和 10 mmol ? L-1醋酸铁;梯度洗脱程序如下：0?0. 5 min, 0%B； 0. 5?0. 8 min, 0?100%B； 0. 8?3. 0 min, 100%B； 3. 0?3. 2 min, 100% ?OB； 3. 2 ?5. 0 min, 0%B；流速 0. 2 mL ? min-1； 进样量10 uLo 2. 1.2质谱条件ESI离子源；MRM检测模式；检测离子 为负离子[M-H]-；离子源温度550 °C；离子喷雾电压-4 500 V； Gas 1 为 0.379 MPa； Gas 2 为 0.379 MPa；气帘气压 0. 138 MPa；咖啡酸和内标肉桂酸的检测离子对分别为m/z : 178. 9/134.8, 146. 8/102. 8O 2. 2咖啡酸体内药动学考察 12只SD大鼠随机平均分成2组，分别为静脉注射组和 灌胃组。静脉注射组大鼠按2 mg ? kg-1于股静脉注射给药, 并与给药后 0.083, 0.167, 0. 5, 1, 2, 3, 5, 8, 12 h 眼 球后静脉丛采血0. 5 mLo灌胃组大鼠按10 mg ? kg-1的剂量 灌胃给