一株产紫杉醇内生真菌的分离及其代谢产物的研究-中国医药生物技术.PDFVIP

202 中国医药生物技术 2010 年 6 月第5 卷第 3 期 Chin Med Biotechnol, June 2010, Vol. 5, No. 3 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2010.03.008 ·论著· 一株产紫杉醇内生真菌的分离及其 代谢产物的研究 卢陆洋，秦竹，徐金库，李新松 【摘要】 浮培养等[4-6] 。然而因为这些方法成本高、产率低， 目的 从南方红豆杉（Taxus chinensis var. mairei）中分离产 目前还无法应用于工业生产。 紫杉醇内生真菌，并研究其抗肿瘤细胞活性。 1993 年，Stierle 等[7] 首次报道短叶红豆杉 方法 采用组织块法从南方红豆杉的树根部、树主干内层、 中分离出了可产紫杉醇的内生真菌 Taxomyces 侧枝及针叶分离纯化内生真菌，经液体发酵培养，抽提发酵 andreanae ，这为生产紫杉醇提供了潜在新途径。内 粗产物，以标准紫杉醇为对照进行薄层层析（TLC ）、紫外 生真菌生长迅速，培养基成本相对较低，菌种易于 光谱（UV ）、HPLC 、质谱（MS ）分析。同时将经上述方法 改良，可以大幅度提高紫杉醇产量，同时也能保护 确认后的内生真菌产的紫杉醇作用于人宫颈癌 HeLa 细 红豆杉资源，维持生态平衡。此后，国内外研究者 胞，采用 MTT 法分析其抗肿瘤细胞活性。 相继报道了从不同的红豆杉种类中分离出不同的 结果 从南方红豆杉主干韧皮部分离得到 1 株产紫杉醇内 产紫杉醇内生真菌[8-11] 。为了拓展红豆杉内生真菌 的种群资源，寻找发酵法生产紫杉醇更有效的潜在 生真菌 D62 ，其紫杉醇产量为 148.95 μg/L 。对菌株 D62 的 菌落和菌丝体的形态学分析表明其属于镰刀属（Fusarium 途径，本研究以南方红豆杉（Taxus chinensis var. mairei ）为材料，从其中分离纯化内生真菌，并通 sp. ）。将该菌株产紫杉醇作用于 HeLa 细胞，表现出明显的 致细胞凋亡作用。 过薄层层析（TLC ）、紫外光谱（UV ）、HPLC 、质 谱（MS ）对其代谢产物进行分析，以确定其是否 结论 南方红豆杉中分离得到的产紫杉醇内生真菌 D62 为紫杉醇，同时分析紫杉醇的抗肿瘤细胞活性。 具有优良的发酵特性。 【关键词】 抗肿瘤药，植物； 真菌； 发酵； 红豆 1 材料与方法 杉属 1.1 材料 中国医药生物技术, 2010, 5(3):202-207 1.1.1 样品采集 南方红豆杉采集于江苏省紫金 山，按照不同方位（向阳面和背阳面）随机选取树 紫杉醇（Paclitaxel ，商品名 Taxol ） 是复杂的 二萜类衍生物，最早于 1971 年由 Wani 等[1]从短 根部、树主干内层、侧枝及针叶，装入灭菌纸袋内 编号备用。 叶红豆杉（Taxus breviifolia Nutt. ）的树皮中分离， 1.1.2 培养基配置 马铃薯葡萄糖琼脂培养基 具有独特的催化微管蛋