一种点杂交膜预处理方法的建立及应用.PDFVIP

生物技术通报 ·技术与方法· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2015, 31 11 :121-124 一种点杂交膜预处理方法的建立及应用 1，2 2，3 1 2 姜超   苏小琴   张学文  潘映红 （1. 湖南农业大学生物科学技术学院，长沙 410128 ；2. 中国农业科学院作物科学研究所 / 农作物基因资源与基因改良重大科学工程， 北京 100081 ；3. 云南农业大学普洱茶学院，昆明 650201） 摘 要 ： 旨在解决手工点样斑点杂交中样品点密度小、点样体积受限制和点样点不规整等问题，建立了一种新的点杂交膜 预处理方法。首先根据预设点样点的大小、排列方式和密度，制作柱状凸起模具 ；其次将模具固定于杂交膜上，使模具凸起部位 与膜紧密接触 ；再将熔化的石蜡涂布于膜上非模具接触部位，待石蜡凝固后移走模具，获得预处理杂交膜。以荧光染料IRDye800 标记的抗体为样品进行直接点样检测，同时提取水稻、小麦和大豆的蛋白进行点杂交实验验证。结果显示，利用上述方法得到非 点样部位具有疏水性的预处理NC 膜和PVDF 膜，其点样点位置、形状和大小固定，点样密度高。不同体积荧光染料标记抗体直接 点样得到的荧光图像整齐规范，水稻、小麦和大豆蛋白与水稻看家蛋白抗体Anti-HSP 杂交后均能检测到稳定信号。杂交膜经预处 理后可最大限度实现点样点位置、大小和形状的统一，并能显著提高上样体积和点样密度。 关键词 ： 杂交膜 ；点杂交 ；预处理 ；预处理膜 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2015.11.013 Pretreatment and Application of Membrane for Dot Hybridization 1，2 2，3 1 2 Jiang Chao Su Xiaoqin Zhang Xuewen Pan Yinghong （1. ， ， 410128 ；2. ， College of Bioscience and Biotechnology Hunan Agriculture University Changsha Institute of Crop Science Chinese s ， 100081 ；3. - ， ， 650201 ） Academy of Agricultural Science Beijing College of Longrun Pu erh tea Yunnan Agricultural University Kunming Abstract: In order to solve the problems of the low density, the volume limitation, and the irregular shape of sample point in dot hybridization when samples were manually