药用化学 教学课件 ppt 作者 杨丽敏 主编 李煜 马征 高梅英 副主编 潘亚芬 主审第7章 分光光度法.PPTVIP

7.1.2吸收光谱 7.4吸光光度法的仪器 一般由光源、单色器（分光系统）、吸收池、检测系统和信号显示系统等五部分组成。 （一）光源 常用的光源为6-12伏低压钨丝灯，电源由温器供给，为了保持光源强度的稳定，以获得准确的测定果，电压必须稳定。 （二）单色器（分光系统） 单色器的作用从光源发出的复合光中分出所需要的单色光。 单色器通常由由入射狭缝、准直镜、色散元件、聚焦镜和出射缝组成。 （三）吸收池（比色皿） 比色皿是用透明无色的光学玻璃制作的。大多数比色皿为长方形，也有圆柱形的。一般厚度为0.5、1、2和3厘米。 （四）检测系统(又叫光电转化器) 在光度计中，常用的是硒光电池。晒光电池和眼睛相似，对于各种不同波长的光线，灵敏度是不同的。对于波长为500-600nm的光线最灵敏。而对紫外线，红外线则不能应用。 光电管和光电倍增管用于较精密的分光光度计中。具有灵敏度高、光敏范围广及不易疲劳等特点。 （五）信号显示系统 早期使用的是检流计、微安表、电位计、数字电压表、自动记录仪等。 现代的分光光度计广泛采用数字电压表、函数记录仪、示波器及数据处理台等。 测量光电流的检流计常用悬镜式检流计(也称作直流复射式检流计)，其灵敏度可达10-9安培／格。为了保护检统计，使用中要防止震动或大电流通过。检流计标尺上有两种刻度，等刻度的是表示百分透光率(T％)，对数刻度表示吸光度(A)。 根据透光率T，如果把入射光强度IO当作IO光强单位，透过光强度当作100光强单位中的一部分，这一数值为百分透光度，亦称为百分透光率。 邻二氮菲比色法测定水样中铁的含量 一、实验目的 1、学会使用721型分光光度计，了解和掌握分光光度法测定原理。 2、学会邻二氮菲法测定试样中微量铁含量的原理及方法。 3、了解分光光度计的构造及使用。 4、学会标准曲线的方法。 二、实验原理 邻二氮菲是测定微量铁的一种较好试剂，?? 在pH=2.0～9.0的条件下，Fe2+与邻二氮菲生成很稳定的橙红色的络合物，反应式如下： 配合物的配合比为3 ：1。Fe3+与邻二氮菲作用形成蓝色配合物，稳定性较差，因此在实际应用中常加入还原剂盐酸羟胺，使 Fe3+还原为Fe2+，与显色剂邻二氮菲作用。 在显色前，首先用盐酸羟胺把Fe3+还原为Fe2+： 4 Fe3++2NH2OH═4 Fe2++N2O+H2O+4H+ 测定时，控制溶液酸度在pH=2～9较适宜，酸度过高，反应速度慢，酸度太低，则Fe2+水解，影响显色。Bi3+、Ca2+、Hg2+、Ag+、Zn2+离子与显色剂生成沉淀，Cu2+、Co2+、Ni2+离子则形成有色络合物，因此当这些离子共存时应注意它们的干扰作用。 三、仪器和药品 仪器 721型分光光度计（722型分光光度计）容量瓶8个（50mL），10mL移液管（有刻度）1支，5mL移液管（有刻度）1支，5mL量筒1个，500mL烧杯1个，洗瓶1个，洗耳球1个，小滤纸，镜头纸。 药品 （1）铁标准溶液（100 ） 准确称取0.8634g铁盐NH4Fe(SO4)2·12H2O，置于烧杯中，加入20mL 6mol/L HCl和少量水，溶解后，定量转移入1L容量瓶中，加水稀释至刻度，充分摇匀。 （2）铁标准溶液（10 ） 用移液管移取上述标准溶液10.00mL，置于100mL容量瓶中，加入6mol/L HCl 2.0mL，然后加水稀释至刻度，充分摇匀。 （3）10%盐酸羟胺溶液（新配制） （4）0.1%邻二氮菲溶液（新配制） （5）HAc-NaAc缓冲溶液（pH≈5.0）。称取136g NaAc ，加水使之溶解，在其中加入120mL冰醋酸，加水稀释至500mL 。 四、内容及步骤 1、邻二氮菲-Fe2+ 吸收曲线的绘制 用吸量管吸取铁标准溶液（10 ） 0.0、2.0、4.0mL分别放入50mL容量瓶中，加入1mL 10%盐酸羟胺溶液、2.0mL 0.1%邻二氮菲溶液和5mLHAc-NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀。放置5min，用3cm比色皿，以试剂溶液为参比溶液（即在0.00mL铁标准溶液中，加入相同试剂），在721分光光度计中，在420～600nm波长范围内分别测定其吸光度值。在临近最大吸收波长处应间隔波长5～10nm测其A值，其他各处可间隔波长20～40nm测其A值。然后以波长为横坐标，所测A值为纵坐标，绘制吸收曲线，并找出最大吸收峰的波长，以 表示。 2、标准曲线的绘制 用吸量管吸取铁标准溶液（10