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小肠结肠炎耶尔森菌感染腹泻的实验室诊断研究 李铭新(辽宁省沈阳市苏家屯区疾病预防控制中心 M0101) 【关键词】小肠结肠炎耶尔森菌 感染腹泻 实验室诊断 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2013) 43-0058-02 小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica)是一种人畜共患病的病原菌， 分布很广泛，近年来引起人们广泛关注。由于该菌能引起人类感染性腹泻，并且 由它感染可引发后遗症，而逐渐受到全球重视。小肠结肠炎耶尔森菌是一种嗜冷 菌，0?4°C仍可繁殖并产生毒素，引起急性胃肠炎型食物中毒，乂称“冰箱病”， 该菌引起的食物中毒近年来时有报道[1-3]o耶尔森菌病典型症状为胃肠炎症状、 发热，亦可引起阑尾炎。有的引起反应性关节炎，另一个并发症是败血症，即血 液系统感染，尽管较少见，但死亡率较高。我国小肠结肠炎耶尔森菌的监测工作 从2005年开始。由于医务人员普遍缺乏对木菌的认识，临床医生在对胃肠道腹 泻病人进行诊断时往往忽略了此菌感染的可能性，检验人员也很少能为临床诊断 提供准确的实验室检测结论。现就该菌的实验室检测方法进行分析总结。 1传统的分离培养方法 目前检测小肠结肠炎耶尔森菌的金标准仍为分离培养法。为了防止漏检，提 高检出率，必须采用增菌的方法，以使受损伤的小肠结肠炎耶尔森菌得到较好的 恢复和繁殖或从污染少量细菌的样品中检出。由于该菌能在0?4°C牛长，采用4°C 冷增菌，有利于小肠结肠炎耶尔森菌存活和缓慢繁殖，而对大多数其它细菌不利 或保持不变，特别适用于含菌量少的被检材料，同时用改良磷酸盐缓冲液对木菌 有一定的选择性，经冷增菌培养后，分别在7d、14d、21d时进行分离，可获得 较好的检出效果，虽然增菌时间长，但可提高检出率。 由于小肠结肠炎耶尔森菌较其它革兰氏阴性细菌牛长慢，其它细菌在弱选择 性琼脂平板上，在22?26°C情况下仍可生长较快，而耶尔森菌往往会被掩盖。 为控制其它细菌过多生长，采用耶尔森菌对弱碱性有较高抵抗力的特点，将其冷 增菌后的样液，经弱碱液迅速处理15秒，立即接种选择性平板进行分离，此方 法可杀死大部分不耐碱的其它细菌，可提高小肠结肠炎耶尔森菌的检出率。但是 在碱处理过程中，必须严格掌握处理方法，不宜超过时间，以免影响检出效果。 需要注意的是检验乳品时不需要进行碱处理，增菌培养后直接进行分离，尤其在 细菌污染较少情况下的样品，经碱处理后反而会影响该菌的检岀率。 小肠结肠炎耶尔森菌可以在大多数培养基上生长，使用选择性培养基仍然是 最常用的方法。CIN培养基是Schiemann在1979年开发的，Head等人做了包括 麦康凯培养基在内的几种选择性培养基分离小肠结肠炎耶尔森菌的对比实验，发 现CIN琼脂是最有效的。CIN极大地抑制了杂菌，而小肠结肠炎耶尔森菌是明显 的深红色中心，外周围绕半透明的区域（公牛眼）。红色色素沉着是发酵D■甘露 醇的结果。但是CIN琼脂价格较高，不易在基层实验室推广使用。由于CIN选择 琼脂配方中的Irgasan成分在我国不易购买，改用二苯隴代替，效果相同，此改 良后的CIN称为“CINJ。 小肠结肠炎耶尔森菌生化反应一般在22?30°C下较为稳定。由于小肠结肠 炎耶尔森菌的血清型别和生物型别较多，生化性状复杂不定，易受培养温度，时 间等各种条件的影响，还与地理分布、菌株来源等也有着一定关系。为了避免对 实验结果的影响，必须严格遵守试验要求。 根据小肠结肠炎耶尔森菌0抗原可分为50种以上血清型，但只有几种血清 型与致病性有关。致病型别各地区不同，我国主要为0： 9、0： 8、0： 5、0： 3 等。某些“0”抗原同其它细菌有共同性，如6 9与布鲁氏菌有交叉反应，0:12 与沙门氏菌有交叉反应等，在流行病学调查中，血清学诊断起着较为重要的作用, 但在区分致病性与非致病性上价值不大。 由于不同地区小肠结肠炎耶尔森菌致病菌株的血清型分布不同[4],口该菌血 清型别较多，分离培养法虽然为小肠结肠炎耶尔森菌检验的国家标准方法，但是 已不能满足快速检测。对于大批量样本的筛检，该方法成本高，人员操作费吋、 费力。急需建立一种新的方法快速准确检测小肠结肠炎耶尔森菌。 2 PCR检测 小肠结肠炎耶尔森菌产生毒力的主要基因是粘附侵袭位点ail基因，失去ail 的菌株毒力均下降，几乎在所有的腹泻病人中都能分离到携带ail的致病菌株［5］。 因foxA和ail基因二者联合可以作为小肠结肠炎耶尔森菌检测的靶基因［6］,肖 玉春等⑺报道，用foxA和ail基因联合的PCR检测法检测来源于生猪标本中的小 肠结肠炎耶尔森菌，检出率明显高于分离培养法（P0.05）?实验分别采用了 ail和 foxA基因联合PCR扩增方法与分离培养法检测生