高分子量腈水合酶工程菌生产烟酰胺的工艺建立-食品与发酵工业.PDF

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食品与发酵工业 FOODANDFERMENTATIONINDUSTRIES DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.015693 引用格式:郭军玲,王哲,刘中美,等.高分子量腈水合酶工程菌生产烟酰胺的工艺建立[J].食品与发酵工业,2018,44(2):8-14. GUOJunling,WANGZhe,LIUZhongmei,etal.EstablishmentoftheprocessofnicotinamideproducedbyEscherichiacoliexpressinghighmo lecularmassnitrilehydratase[J].FoodandFermentationIndustries,2018,44(2):8-14. 高分子量腈水合酶工程菌生产烟酰胺的工艺建立 郭军玲,王哲,刘中美,周哲敏 (江南大学 生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,江苏 无锡,214122) 摘 要 为提高表达玫瑰色红球菌(RhodococcusrhodochrousJ1)来源的高分子量腈水合酶大肠杆菌Escherichia coliBL21(DE3)/pET24a(+)nhhBrbsArbsG(BAG)的菌体酶活,建立了合适的烟腈全细胞催化工艺以及重组工 4 程菌的高密度发酵工艺。采用正交试验 L(3)对摇瓶培养基中各组分进行优化,比较烟腈底物流加和底物分 9 批补料工艺,对重组菌进行分批补料高密度发酵培养。培养基优化后其菌体生物量提高到4.42gDCW/L,细胞 比酶活提高到30.91U/mgDCW;与烟腈底物流加相比,烟腈分批补料工艺更适合烟酰胺的生产,通过此工艺的 反应,摇瓶发酵后的BAG能够生产390g/L烟酰胺;对BAG进行5L发酵罐分批补料扩大培养,菌体生物量最高 达到73.97gDCW/L(OD =200),细胞比酶活最高为42.70U/mgDCW,单位发酵液酶活最高为2813U/mL,用 600 较高密度的发酵罐培养后重组菌进行烟腈催化反应,产物质量浓度能达到537g/L,是已报道的大肠杆菌重组表 达腈水合酶产烟酰胺所得终质量浓度的最高水平。 关键词 腈水合酶;大肠杆菌;全细胞催化;底物分批补料;高密度发酵   腈水合酶(Nitrilehydratase,简称 NHase,EC4.2. 酰胺、尼克酰胺以及 5氰基戊酰胺的生产已有数十 [2] 1.84)是一种能够催化腈类物质生成酰胺类化合物 年历史 。尼可酰胺是一种水溶性维生素,也是一 [1] 种用于药物和杀虫剂合成的重要中间体,在制药行业 的金属酶 ,主要用于工业上丙烯酰胺和烟酰胺的 [2] 和食品工业中有重要应用[10-11]。目前用于生产尼可 生产 。常见 NHase大 多数 来 源 于红 球 菌 属 (Rhodococcus)、假诺卡氏菌属(Pseudonocardia)以及 酰胺的菌株为玫瑰色红球菌 Rhodococcusrhodochrous [12-13] [3] J1(J1),它也是第三代工业菌株 。在 J1中同时 诺卡氏菌(Nocardia) 。根据 NHase活性中心所含 金属离子的不同,一般可将其分为铁型腈水合酶(Fe 存在两种不同类型的腈水合酶,按其分子量不同分为 NHase)和钴型腈水合酶(CoNHase),他们的活性中 高分子量腈水合酶(HNHase)和低分子量腈水合酶 [4]

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