生物工程设备 第九章萃取和色谱分离1.ppt

酶 ——底物或底物类似物 外源凝集素 ——多糖化合物 ——抑制剂 ——糖蛋白 ——辅因子 ——细胞表面受体蛋白 抗体 ——抗原 ——细胞 ——病毒 核酸 ——互补碱基链段 ——细胞 ——组蛋白 激素、微生物 ——受体蛋白 ——核酸聚合酶 ——载体蛋白 ——核酸结合蛋白 生物亲和关系 柱色谱，具有进样量大，回收容易等优点，但其分辨率不如纸上色谱和薄层色谱高； 纸上色谱，以滤纸为载体，是以滤纸纤维及其结合水作为固定相，以有机溶剂作为流动相的分配色谱分离。纸上色谱分离具有设备简单、操作方便、分离效率高、所需样品量少等优点，但分离量少、回收困难，分离速度慢等； 薄层色谱分离 ，将固定相在玻璃平板上铺成薄层而进行分离的一种分离技术。薄层色谱是柱色谱和纸上色谱两者的结合。 2. 按固定相形状不同分类 工业规模的色谱分离流程 色谱分离设备 带热夹套分离柱 反转式分离柱 ?KTAexplorer ?KTApurifier ?KTAFPLC 色谱分离设备 气相色谱: 流动相为气体（称为载气）。 按分离柱不同分为：填充柱色谱和毛细管柱色谱 按固定相的不同又分为：气固色谱和气液色谱 液相色谱仪 Resolution: the power to separate peaks 200 400 ml 0 Maximum number of peaks in RPC 150 0 10 20 ml Maximum number of peaks in gel filtration ca 15 Remember: we are not purifying peaks, but proteins peptides ! 实验室层析和大规模层析的分别 实验室 大规模生产 分辨率 越多峰越好 要求纯度 种类 提高分辨率 纯度 定性 增加 增加 样品量 产量 (生产力) (峰越少越好) 上样速度 不注重 最大样品处理速度 次/h 生产力=g/ml 胶/h 线性放大 固定以下条件： 1. 相同线行流速 2. 相同缓冲液 3. 相同填料 4. 相同柱高 5. 相同样品浓度和pH 6. 相同样品体积和柱床体积比例 7. 相同梯度体积和柱床体积比例 放大： 1. 柱直径 2. 体积流速 3. 上样体积 3。色谱分离过程的放大 即在生产率和纯度维持不变的情况下增加生产能力 解决办法：增加分离柱中的溶液流量。 要维持产品纯度不变则需要分离柱中各组分的浓度分布不发生明显的变化。 一般情况下各组分在分离柱中的浓度分布接近于高斯分布，其浓度曲线表达式为： 或者： 当出现最大洗脱浓度时可改成： 式中：co-----洗脱出现峰值时的最大浓度 C----洗脱任一时间的浓度 To-----洗脱达到最大浓度所需要的时间 T-洗脱时间 σ-----标准偏差 可见浓度c是co，V/Vo,及σ3个参数的函数，前两者容易保持恒定，最大浓度co取决于进口浓度 在固定床色谱中，标准方差可以由下式表示： 式中：w----液体表观流速 L-分离床层高度 A—固定相比表面积，对于球形填充颗粒，若床层孔隙率为ε，则： K----速度系数 d---颗粒直径 可见，标准方差是流速w,床层厚度L，颗粒比表面积A，速度系数K的函数。若吸附为颗粒内部的扩散反应所控制，则K和w无关 若控制在流体与颗粒的表面扩散间则： 此时：K随w的增加而增加，随颗粒的直径增加而减小对于颗粒的内部扩散和反应所控制时： 由外部扩散控制时： 上面两式可写成等式： 式中的参数分别表示实验条件下和放大后的标准偏差，液体速度，颗粒直径及床层高度 可见，增加分离柱颗粒直径d会使σ增大，改变分离高峰 若固定d不变，增加w，L并使w/L保持不变，则流体阻力将会显著增加 采用短而粗的分离柱，可增大流量可通过增加流通横截面来实现放大 2.0 1.0 0 0 1 2 3 4 5 6 (column volumes) A 280 nm 2.0 1.0 0 0 1 2 3 4 5 6 (column volumes) A 280 nm SOURCE 30RPC FineLINE 200L 400-fold scale up 10 mm diameter column