盐酸法舒地尔防治大鼠肾脏缺血再灌注损伤的实验研究.docxVIP

盐酸法舒地尔防治大鼠肾脏缺血再灌注损伤的实验研究 国伟1王盟1通讯作者 王盟通讯作者 孟建中2 伊忻1 (1济宁市第一人民医院山东济宁272111； 2济南军区总医院山东济 南 250031) 【摘要】目的探讨盐酸法舒地尔防治大鼠肾脏缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)的作用机制。建立大鼠肾脏缺血再灌注(IRI)动物模型，随机 将75只Wistar大鼠分成空白对照组(n=25), IR模型组(n=25),治疗组(n=25),并 观察5个时间点(6、12、24、48、72h)各组血清肌肝(Ser)、尿素氮(BUN)、血管内 皮生长因子(VEGF)的水平变化；并釆用免疫组化法检测RhoA蛋白表达。结果 表 明：(1) IR组Scr、BUN水平于再灌注后6h开始升高,48h达高峰,治疗6h、 12h 24h、48h 72h组均低于模型组(Plt;0.01)o (2)肾组织RhoA、VGEF表达于 再灌注后6h开始升高，12h达到峰值，24h后下降，但均较对照组明显增加 (Plt;0.01)o (3)盐酸法舒地尔治疗组(F组)Scr、BUN、RhoA、VGEF表达均明显低 于IR模型组(Plt;0.01)。盐酸法舒地尔可能通过阻断Rho/Rho激酶信号通路，减 少VEGF的牛成，抑制内皮细胞通透性，减轻肾脏缺血再灌注损伤。 【关键词】Rh。激酶缺血再灌注血管内皮牛长因子盐酸法舒地尔 【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2013) 39-0050-03 1引言 缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)是引起自身和移植肾脏发牛 急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的主要原因之一，导致肾脏IRI的原因有心血 管疾病、脓毒症、创伤、休克、脱水及外科手术等。研究发现肾缺血再灌注损伤 时主要累及近端肾小管上皮细胞，引起结构和功能的破坏。近年来研究发现血管 内皮牛长因子(VEGF)特异性作用于内皮细胞(endothelial cells, ECs),在诱导血管内 皮细胞渗透性增加机制中起重要的作用。Rho/Rho激酶是具有信号传导和分子开 关作用的信号多肽，参与血管平滑肌收缩、细胞分化及细胞凋亡等多种细胞功能 o目前有学者认为Rho/Rho激酶参与了内皮细胞的收缩[2],增加了内皮细胞 的通透性，是调控EC通透性改变的信号分子⑶。研究表明Rho/Rho激酶信号通 路参与VEGF诱导的体外内皮细胞运动和血管生成⑷。盐酸法舒地尔作为一种 Rho激酶特异性抑制剂，通过阻断Rho/Rho激酶信号通路具有扩血管、抗炎等广 泛的作用。本实验通过观察盐酸法舒地尔对肾脏缺血再灌注损伤中血清Scr、BUN 及肾组织RhoA、VGEF的影响，探讨其防治肾脏缺血再灌注损伤可能的机制。 2材料和方法 2.1试剂与材料 雄性Wista大鼠（由山东大学医学院实验动物中心提供）。盐酸法舒地尔注射 液由天津红日药业股份有限公司提供（2ml/支，30mg）o兔抗大鼠VEGF多克隆抗 体试剂盒由美国NEO MARKER公司提供，兔抗人鼠RhoA多克隆抗体由美国Santa Cruz公司提供。 2.2动物分组与模型建立 2.2.1健康雄性Wista大鼠75只，体S 270 ± 10g,经适应性饲养1周后, 随机分成3组：空白对照组，IR模型组，法舒地尔治疗组，每组各25只。3组 大鼠分别再随机分成再灌注6、12、24、4 72小吋5个不同吋段亚组，每组各 5只。 2.2.2 IRI模型建立：10%水合氯醛（3?5ml/kg）腹腔注射麻醉成功后，沿 腹正中纵轴线做切口，暴露双侧肾脏，用无损伤微型动脉夹迅速阻断双侧肾动脉, 肾脏由红色变紫黑色表示夹闭成功，共持续夹闭60min松开动脉夹。Con组：暴 露双侧肾脏后，覆盖浸有生理盐水的纱布，60min后去除纱布后逐层关腹，缝合 切口。IR组:建立肾脏IRI模型。F治疗组：同法建立IRI模型，在缺血再灌注前5 分钟腹腔注射盐酸法舒地尔（30mg/kg）o 2.3观察指标 2.3.1血尿素氮、血肌酹：各组在相应吋间点开服取静脉血5ml,分别检测 血清Scr、BUN的含量。 2.3.2免疫组化检测VEGF、RhoA免疫组化方法采用辣根过氧化物酶标记 的链酶卵白素染色法(SP法)检测VEGF、RhoAo 2.4统计学分析方法 所有数据应用SPSS13.0统计软件进行统计分析。计数数据以均数士标准 (x-plusmn;s),各组间样本均数比较均采用单因素方差分析(one-wayAN0VA)o Plt;0.05表示差别有统计学意义，Plt;O.Ol表示差别有显著统计学意义。 3结果 3.1各组实验大鼠Scr、