高效液相检测器.pptVIP

* Universal detection – Of all the universal detectors, RI is the most universal Ease of use – Very few instrument settings (For Waters – Sampling Rate, Filter Time, Polarity, Unit label, sensitivity and Internal Temperature Generally robust detectors – The only Waters detector that does not require a PQ Low maintenance costs – See Above Lack of sensitivity Lack of selectivity Sensitive to changes in flow, temperature, viscosity Not useful for gradient elution methods Peaks may be positive or negative * 检测器的选择与应用 高效液相色谱检测器 最常用的液相色谱检测器依次是紫外检测器、示差折光检测器、荧光检测器、安培检测器和蒸发光散射检测器等。 检测器是高效液相色谱仪的三大关键部件之一。按其适用范围检测器可分为通用型和专属型两大类。 专属型检测器只能检测某些组分的某一性质，紫外检测器和荧光检测器属于这一类，它们只对有紫外吸收或荧光发射的组分有响应；通用型检测器检测的是一般物质均具有的性质，示差折光和蒸发光散射检测器属于这一类。 理想的HPLC检测器 高灵敏度；可忽略的基线噪音 线性范围宽 独立于流动相及操作参数的响应 对压力、温度及流速等变化不敏感 长时间操作的稳定性 死体积小 非破坏性 选择液相色谱的检测器 要考虑的因素： 你要分离的化合物/样品的化学特性 化学结构、分子量及紫外光谱等等 流动相的影响（溶剂、缓冲盐改性剂等） 梯度还是等度 灵敏度需求 是否有双检测的需求 表1. 液相色谱常用检测器的一般性质 检测器 选择性 梯度洗脱 线性范围 最低检测限(g/ml) 敏感性 对流速 对温度 紫外 紫外吸收 可以 105 2×10－10 不敏感 低 示差 通用型 不可以 104 2×10－7 不敏感 10－4 荧光 荧光物质 可以 103 10－11 不敏感 低 电化学 电活性 不可以 106 10－12 敏感 1.5% 电导 离子 不可以 2×104 10－8 敏感 2% 一、紫外检测器(ultraviolet detector;UVD) 紫外检测器是一种应用最广HPLC检测器,当检测波长范围包括可见光时，又称为紫外-可见检测器。紫外检测器的工作原理是朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律。 优点：应用最广，对大部分有机化合物有响应；灵敏度高（检测下限为10-10g／ml）；线性范围宽；它的最重要特征是对流动相的流速和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱。由于灵敏高，因此即使是那些光吸收小、消光系数低的物质也可用UV检测器进行微量分析。 缺点：但它只能检测有紫外吸收的物质，而且流动相有一定限制，即流动相的截止波长应小于检测波长。如果溶剂中含有吸光杂质，则会提高背景噪音，降低灵敏度。此外，梯度洗脱时或测定波长较短时，基线还会产生漂移。 例1：紫外检测器检测大黄素和大黄酚 光电二极管阵列光谱检测器是紫外检测器的重大进展。采用这种检测器可以瞬间实时对流出液进行全光谱检测, 使提供的信息量大幅度增加。换句话说, 在一次色谱操作中, 可同时获得吸光值、流出时间和各组分的紫外-可见光谱图在一起的三维谱图, 提供既定量又定性的色谱信号。吸收光谱用于组分的定性，色谱峰面积用于定量。 光电二极管阵列检测器(photodiode array detector;PDAD) 光电二极管阵列检测器 使用二极管阵列检测器，可以对色谱峰进行光谱扫描，峰纯度鉴定的定性分析，在方法研究中可以快速选择最佳检测波长，在多组分混合物分析中可以编辑波长程序。 采用二极管阵列检测器进行论证，也是目前常采用的一个强有力的手段。它通过对一个色谱峰的数点进行紫外扫描，然后比较所得到的扫描图谱的接近程度从而评价被检测峰的纯度。 利用二极管阵列检测器进行峰纯度检查的缺点： （1）杂质浓度低，或与主成分相比吸收太小，达不到检测灵敏度，无法检测出来。 （2）当杂质的发色团与主成分一致，或者说杂质与主组分有相同或几乎相同的光谱图且具相近的