乳与乳制品非常规理化指标检验维生素B1 检测.doc

乳与乳制品非常规理化指标检验维生素B1 检测 YLNB 5.8 1. 依据 GB/T5413.11-1997 2. 范围 用荧光法测定维生素B1 的方法,适用于乳粉中维生素B1 的测定。 3. 方法提要 样品在稀盐酸溶液中消化，过滤，除去蛋白质等物质。如果样品中维生素B1系游离态，可直接在碱性铁氰化钾中氧化成噻嘧色素，在紫外光照射下发出荧光，其荧光强弱与噻嘧色素成正比；如果维生素B1系结合态，则须经酶解转为游离态，作荧光检测。检测所使用的激发波长E1 为365nm，发射波长EM 为435nm。 4. 试剂和设备 所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。 4．1 盐酸：c（HCl）为0.1mol/L。 4．2 氢氧化钠：c（NaOH）为150g/L。 4．3 正丁醇：重蒸馏。 4．4 乙酸钠：c（NaAc）为2mol/L。 4．5 酸性乙醇：体积分数为20%。用盐酸调节pH为3.5～4.3。 4．6 淀粉酶（生化试剂）溶液：100g/L。 4. 7 铁氰化钾：c[K3Fe(CN)6]为10g/L，使用当天配制。 4．8 标准溶液 4．8．1 维生素B1 标准贮备液，浓度为100μg/mL。 准确称取50.0mg（在五氧化二磷干燥器内至恒量的）分析纯维生素B1盐酸盐，溶解于400mL体积分数为20%的酸性乙醇溶液（4.5）中，并定容于500mL棕色容量瓶中，于10℃左右贮存。 4．8．2 维生素B1 中间液，浓度为10μg/mL。 吸取上述标准贮备液5mL，用0.1mol/L盐酸（4.1）稀释至50mL，于10℃左右贮存。 4.8.3维生素B1标准工作液 吸取上述中间液1mL，稀释至50mL，现用现配。 4．9碱性铁氰化钾：取4毫升10g/L的铁氰化钾（4 .7），用150g/L的氢氧化钠溶液（4.2）稀释至100mL，配好后置于暗处4h内使用。 4. 10荧光分光光度计。 5. 方法 5．1 抽提 于150mL三角瓶中准确称取2g左右样品，加盐酸（4.1）60mL，用铝箔纸盖住瓶口，在137.2～161.7kPa压力（125℃）下消化半小时，冷却后，用乙酸钠（4.4）调pH值为4.5，然后加5mL酶溶液（4.6），在37℃条件下保温过夜，过滤。 5．2 氧化 在两支25mL的试管中，分别5mL标样，在其中一个试管中，立即加入3mL碱性铁氰化钾（4.9），混匀，立即加入10mL正丁醇，猛烈振摇15s以上，静止分层，待荧光测定，另一管不加氧化剂，以3mL的氢氧化钠（4.2）代替，作为空白。 同时吸取样液5mL于另两支试管中，作法同上。 5．3荧光测定 从每一试管中吸上层清液于另一试管中，加少量无水硫酸钠使溶液澄清，作荧光测定。 6. 结果计算 样品中维生素B1（ug/100g）= 式中：Is——样品荧光值； Ib——样品空白荧光值； Isd——标样荧光值； Isb——标样空白荧光值； c——标样浓度，μg/mL； m——样品的质量，g。 D——样品定容体积，ml。 7. 允许差 同一样品的两次测定值之差不得超过两次测定平均值的5%。