GsSAMS基因对苜蓿的遗传转化及转基因新株系的培育.docxVIP

引 言 1 引 言 1.1 本研究的目的和意义 盐碱、干旱和低温严重影响我国乃至世界农业的粮食产量。全球有 20%的耕地受到盐害的威胁，而我国盐碱地面积就达到 3000 多万公顷，另有 2000 多万公顷的盐荒地还未开垦利用。高盐是限制植物生长的主要逆境因子，植物受到盐胁迫会限制其水分的吸收并影响植物细胞中水分的分布，进而制约其生长发育，最终会导致作物死亡，造成农作物严重减产。因此，如何提高植物对盐碱等逆境的抵抗能力，是目前科学研究和生产上亟待解决的关键问题。 苜蓿以“牧草之王”著称，不仅产量高，而且营养价值高，氨基酸组成均衡，各种畜禽均喜食。目前我国苜蓿的种植面积约 133 万 hm2。除此之外，苜蓿还能够改善土壤质量。苜蓿是多年生直根系草本植物，扎根深，在根系周围能分泌酸性物质调解土壤中的碱度，使土壤 pH 值接近 7，同时苜蓿属豆科植物，其根系还具有固氮的作用，所以种植苜蓿能够保持水土，改良盐碱土壤。 20世纪80年代以来，随着分子生物学与基因工程技术的日趋成熟和迅猛发展，基因工程为改良作物耐盐性展示了美好的前景，受到越来越广泛的关注和重视。基因工程技术是在基因水平上提高植物的抗逆性，更具有精确性和稳定性，提高了育种的可操作性，大大加快了育种速度。 本研究利用具有自主知识产权的耐盐基因—GsSAMS，将由不同启动子调控的 GsSAMS 基因分别构建植物表达载体，采用农杆菌介导法对紫花苜蓿优良品种进行遗传转化，获得抗性植株，并对抗性植株进行了分子生物学检测，为培育耐盐碱苜蓿新品（株）系奠定基础。因此，本研究对于建立苜蓿分子育种技术体系，充分利用我国盐碱地资源，扩大苜蓿种植面积，提高苜蓿产量和品质，具有重要的研究价值和广阔的开发应用前景。 1.2 文献综述 1.2.1 植物逆境响应基因的信号传导通路 植物能够感知外界环境的变化并对此做出响应，对于植物的生存来说非常重要。实际上，植物对于外界环境变化的响应包括对胁迫信号的感知、解读和转导，激发一系列下游级联反应，最终调控并转录功能基因的表达。（Chinnusamy et al.，2004；Vinocur and Altman et al.， 2005）。当非生物胁迫来临时，植物细胞膜上的受体最先接受胁迫信号，然后将信号向下游转导，产生第二信使，包括钙离子，活性氧（ ROS ）和肌醇磷酸盐（图 1-1）。这些第二信使，如肌醇磷酸盐，进一步调节细胞内钙离子的水平。钙结合蛋白，又称为钙离子传感器，能感知胞浆内钙离子水平的改变。这些传感器分别与各自下游的分子相互作用，激活蛋白磷酸化 1 东北农业大学理学硕士学位论文 的级联反应，最终引起功能蛋白表达或者由转录因子控制的特定种类的基因表达。这些基因的表达产物使植物能够适应不利的环境条件并正常生长。由此可见，植物单个细胞对于胁迫的响应就像是一个完整的有机体一样协调。胁迫诱导不仅使基因的表达发生了改变，还促进了一些植物激素（如脱落酸，水杨酸和乙烯）产生。这些分子能够扩大胁迫反应最初的信号，并引起下一轮的信号转导，这种信号传导可能遵循与之前相同的路径，或者是完全不同的信号转导通路。辅助分子（例如修饰蛋白）可能没有直接参与信号转导过程，但它们参与了信号元件的修饰或组装，并能够附着在信号蛋白上与其协同作用。这些辅助分子包括豆蔻酰化酶，糖基化酶，甲基化酶和泛素化酶等。 胁迫 和其他第二信使 Ca2+传感器 激酶/磷酸化酶 和各种蛋白磷酸化酶 转录因子 主要胁迫响应基因 生理反应 1-1 植物非生物胁迫信号转导通路（引自 Shilpi Mahajan, Narendra Tuteja，2005） 在干旱、高盐等非生物胁迫下，植物中的许多基因被诱导表达（Ramanjulu S. and Bartels et al.，2002）。根据这些基因表达产物的功能，可分为两类：一类是在植物抗逆的生理水平上起作用的功能蛋白。这些功能蛋白基因的表达在非生物胁迫信号转导中处于下游，包括离子通道蛋白、水通道蛋白、LEA 蛋白等调节细胞离子与水分平衡的功能蛋白的表达，脯氨酸、甜菜碱等渗透调节物质合成酶的表达以及抗氧化系统中关键酶基因的表达等；第二类是在信号转导过程中调控第一类基因表达的蛋白，包括蛋白激酶和转录因子等，它们在非生物胁迫信号转导中处于中上游。 在植物非生物胁迫信号转导途径中，可能有一些感受器能把收到的不同的胁迫信号独立地传递给各自下游的分子。但是到目前为止，人们对于这种感受器的作用机理还知之甚少。研究表明，同时具有组氨酸激酶活性并能够响应调节功能区的双组分系统在细菌和酵母中是 非生物胁迫信号的感受器。SLN1 是酵母体内的一种能够感受渗透胁迫信号的组氨酸激酶。在渗透胁迫条件下通过 MAPK 信号级联把最初的信号放大，进而激活渗透胁迫响应途径 2 引 言 HOG