小酸盐还原试验标准操作规程1.doc

硝酸盐还原试验标准操作规程 1．目的 规范规范硝酸盐还原试验标准操作规程。 2．原理 硝酸盐培养基中的硝酸盐可被某些细菌还原为亚硝酸盐，后者与乙酸作用生成亚硝酸。亚硝酸与对氨基苯磺酸作用，形成偶氮苯磺酸，再与ɑ奈胺结合成红色的N-ɑ奈胺偶氮苯磺酸。 3．试剂 3.1 硝酸盐培养基成分 蛋白胨 10g 硝酸钾（AR） 2g 蒸馏水 1000ml PH 7.4 3.2 制备 将上述成分混合后，加热溶解，调 PH至7.4，分装试管，每管约4ml,置120℃灭菌15分钟备用。 3.3 试剂配制 甲液：对氨基苯磺酸 0.8g 5mol／L乙酸 100ml 乙液：ɑ奈胺 0.5g 5mol／L乙酸 100ml 4．质控 大肠埃希菌ACTT 25923为阳性，鲍曼不动杆菌ACTT 19606为阴性。 5.操作步骤 将待检菌接种至硝酸盐培养基中，35℃孵育1～2日，加入试剂甲液和乙液各2滴，即刻观察结果。若加入硝酸盐试剂不出现红色，需检查硝酸盐是否被还原。可于原试管内再加入少许锌粉，如出现红色，证明产生芳基肼，表示硝酸盐仍然存在；若仍不产生红色，表示硝酸盐已被还原为氨和氮，也可在培养基内加1支小试管，若有气泡产生，表示有氮气生成，用以排除假阴性。 6.结果判断 呈红色者为阳性。若不呈红色，再加入少许锌粉，如仍不变为红色者为阳性，表示培养基中的硝酸盐已被细菌还原为亚硝酸盐。进而分解成氨和氮。加入锌粉后变为红色者为阴性，表示硝酸盐未被细菌还原，红色反应是由于锌粉的还原所致。 7.注意事项 本试验在判定结果时，必须在加入试剂之后立即判定结果，否则因颜色迅速退色而造成判定困难，如铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等。 8.临床意义 本试验在细菌鉴定中广泛应用，肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐，部分假单胞菌产生氮气