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ONPG试验标准操作规程
1．目的
规范ONPG试验标准操作规程。
2．原理
ONPG试验又称 半乳糖苷酶试验。某些细菌具有 半乳糖苷酶，可分解邻-硝基酚- -D-半乳糖，生成黄色的邻-硝基酚。
3．试剂
3.1 成分
试剂甲：0.01mol/L PH 7.0磷酸氢二钠缓冲液100ml
试剂乙：蛋白胨 3.0g 氯化钠 1.5g
蒸馏水 300ml PH 7.0
3.2 制备 将甲、乙液分别置121℃灭菌15分钟，冷却至40～50℃，乙液加入ONPG0.6g，置56℃水浴中加热溶解，无菌过滤，将滤液与甲液合并分装试管，每管2ml，作无菌试验后备用。
4．质控
大肠埃希菌ACTT 25922为黄色，奇异变形杆菌ACTT 49005为无色。
5.操作步骤
将纯菌落用无菌盐水制成浓的菌悬液，加入ONPG溶液0.25ml，35℃水浴，于20分钟和3小时观察结果。
6.结果判断
通常在20～30分钟内显色。出现黄色为阳性反应。
7.注意事项
7.1 ONPG溶液不稳定，培养基呈黄色即不可使用。
7.2 ONPG试验结果不一定与分解乳糖相一致。
8.临床意义
用于测定不发酵或迟缓发酵乳糖的细菌是否产生此酶，亦可用于迟发酵乳糖细菌的快测鉴定。
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