RhD血型确证试验卡式抗人球法标准操作规程.doc

RhD血型确证试验卡式抗人球法标准操作规程 (一)检验目的 确证初筛RhD血型为阴性的献血者RhD抗原表达情况，防止正常D、变异D(弱D、不完全D、不完全弱D、放散D)被误定型为RhD阴性。 (二)检验原理 通常情况下只有初筛为RhD阴性的献血者需要做确证试验，以确保将真正RhD阴性的血液输给需要RhD阴性血液的患者，而临床初筛为RhD阴性输血患者一般不做确证试验，而是直接输注RhD阴性血液成分。献血者RhD初筛一般使用单克隆IgM抗体或IgM+IgG抗体(纸板法或玻片法)进行检测(盐水法)，可能出现弱D、不完全D、不完全弱D的漏检。RhD血型确证试验采用3个厂家、3个批号，至少两种试剂中含有IgG类抗D抗体，通过卡式抗人球蛋白法进行D抗原检测，可以最大限度减少D抗原的漏检，确定受检者RhD血型。 (三)适用范围 适用于献血者RhD血型确证试验。 (四)设备性能参数 参见DiaMed ID离心机、DiaMed ID孵育器、B600-A型低速离心机使用说明书。 (五)器材与试剂 1.器材 DiaMed ID离心机、DiaMedID孵育器、B600-A型低速离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mmXl2mm)、试管架、记号笔。 2.试剂 DiaMed微柱凝胶Coombs卡，2号稀释液，生理盐水，3个厂家不同来源的抗D标准血清(至少两种试剂是IgG类或含有IgG类抗体)，3系、10系或16系谱细胞(用于阴阳性对照)。 (六)样本要求 供者标本：枸橼酸盐抗凝，全血量≥3ml，经B600-A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血、无凝块及明显乳糜。 (七)校准步骤 参照DiaMed ID离心机、DiaMed ID孵育器、B600-A型低速离心机使用说明书中的校准要求执行。 (八)操作程序 1.取受检者(常规纸板法鉴定为RhD阴性)的红细胞，经生理盐水洗涤3次，取压积红细胞10μl加入2号系统稀释液1.0ml配成1％的红细胞悬液。 2.取3个厂家不同来源的抗D标准血清，一般组合形式为单独IgM抗体、IgM+IgG抗体、单独IgG抗体。 3.在微柱凝胶卡上依次标记IgM抗体检测孔、IgM+IgG抗体检测孔、IgG抗体检测孔、自身对照孔，阴性对照孔和阳性对照孔。 4.在IgM抗体检测孔、IgM+IgG抗体检测孔、IgG抗体检测孔和自身对照孔中分别加入已配制好的受检者1％的红细胞悬液50μl，再分别在对应的孔中加入25μl相对应的标准血清抗体，在自身对照孔中加人受检者血清25μ1。分别在阴性对照孔和阳性对照孔中加入1％阳性对照细胞和阴性对照细胞各50μl，再分别加入IgG抗D抗体25μl。 5.使用DiaMedID专用孵育器37℃孵育15分钟。用DiaMed ID专用离心机在1 030g条件下，离心10分钟。 6.结果判读：自身对照、阴性对照结果为阴性，阳性对照结果为阳性说明试剂和反应体系有效，检测孔出现红细胞凝集在上层或中间层的为阳性，全部沉积在底层的为阴性。自身对照、阴性对照结果为阳性和(或)阳性对照结果为阴性时说明试剂和(或)反应体系失效，需要更换试剂和(或)反应体系后重复试验。 7.三批试验结果中有一批或多批为阳性的，结果即报告应为：D变异型。相应血液应作为RhD阳性血液输给RhD阳性患者，而献血者自身在将来输血时应作为RhD阴性患者对待。 8.检验结果的确认。确证试验结果应由实验室负责人或授权人员进行确认签字，出现阳性结果应将被检血液视为RhD阳性血液使用，阴性结果将被检血液视为RhD阴性血液使用。 (九)质量控制 1.室内质量控制 通过每批次的阴阳性对照和自身对照试验实现。 2.室间质量评价 目前尚无统一的室间质量评价活动。 (十)干扰因素 1.离心条件影响试验结果，最好使用血清学专用离心机，以防假阳性或假阴性结果出现。 2.当用未经洗涤的细胞做试验时，样本中的自身凝集和异常蛋白质可能引起假阳性结果。 (十一)结果计算及测量不确定度 不适用。 (十二)生物参考区间 不适用。 (十三)检验结果可报告区间 阴性、阳性。 (十四)警告／危急值 D变异型相应血液应作为RhD阳性输给RhD阳性患者，而献血者自身在将来输血时应作为RhD阴性患者对待。 (十五)实验室解释 D变异型相应血液应作为RhD阳性输给RhD阳性患者，而献血者自身在将来输血时应作为RhD阴性患者对待。实验室应该向献血者说明D变异型作为